鹽析的原理
破壞了蛋白質(zhì)在水中穩(wěn)定存在的二個因素,從而使蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀。
1、破壞了水化層
在高濃度的中性鹽溶液中,由于鹽離子親水性比蛋白質(zhì)強,與蛋白質(zhì)膠粒爭奪與水結(jié)合,破壞了蛋白質(zhì)的水化層。在高濃度的中性鹽溶液中,由于蛋白質(zhì)和鹽離子對溶液中水分子都有吸引力,產(chǎn)生與水化合現(xiàn)象,但它們之間有競爭作用,當(dāng)大量中性鹽加入時,使得鹽解離產(chǎn)生的離子爭奪了溶液中大部分自由水,從而破壞蛋白質(zhì)的水化作用,引起蛋白質(zhì)溶解度降低,故從溶液中沉淀出來。
2、破壞了電荷
由于鹽是強電解質(zhì),解離作用強,鹽的解離可抑制蛋白質(zhì)弱電解質(zhì)的解離,使蛋白質(zhì)帶電荷減少,更容易聚集析出。
鹽析注意事項
鹽析的成敗決定于溶液的pH值與離子強度,PH愈接近蛋白質(zhì)的等電點,蛋白質(zhì)就愈易沉淀。不同的蛋白質(zhì)的溶解度與等電點不同,沉淀時所需的pH值與離子強度也不相同,故改變鹽的濃度與溶液的pH值,便可將混合液中的蛋白質(zhì)逐個鹽析分開,這種分離蛋白質(zhì)的方法稱為分段鹽析法(fractional salting out)。例如半飽和硫酸銨可沉淀血漿球蛋白,飽和硫酸銨則沉淀血漿清蛋白。