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有關獨子藤中主要藥性成分的測試
儀器與試藥
儀器
Shimadzu LC-10AT型高效液相色譜儀(日本島津公司),SPD-10AT型紫外-可見檢測器(日本島津公司),HW-2000色譜工作站;Millipore溶液過濾器;Millipore 0.45 μm濾膜;AY120電子分析天平(Shimadzu公司);RE-52A旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。
試藥
雷公藤紅素對照品(自制,經HPLC法測定純度≥98%);獨子藤于2008年10月采自廣東省陽春市,由廣東藥學院李書淵教授鑒定為獨子藤Celastrus monospermus Roxb.;硅膠(柱層析硅膠,青島海洋化工有限公司);甲醇為色譜純;水為超純水;其余試劑均為分析純。
方法與結果
供試品溶液的制備
取獨子藤藥材適量,粉碎過40目篩,精密稱取10.0 g,裝入100 mL帶塞三角瓶中,加入三氯甲烷超聲提取3次,每次50 mL,每次30 min。靜置,濾取上清液,旋轉蒸發(fā)儀上濃縮至干。稱取4.0 g硅膠裝柱(1.5 cm×10 cm),以三氯甲烷1 mL超聲溶解樣品,上樣。先以三氯甲烷50 mL進行洗脫,棄去洗脫液,再用三氯甲烷-甲醇(體積比95∶5)100 mL洗脫,收集洗脫液,回收溶劑,旋轉蒸發(fā)儀上濃縮至干。殘渣用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中,0?45 μm微孔濾膜濾過。平行操作5份,作為1~5號供試品溶液。
線性關系的考察
分別精密吸取“2.2”項下對照品貯備液1、2、3、4、5 mL置于5 mL容量瓶中,分別用甲醇溶解并定容,搖勻,制得系列對照品溶液。依次取上述溶液各20 μL進樣,依法測定。以雷公藤紅素的峰面積積分值(A)為縱坐標,質量濃度(ρ)為橫坐標繪制標準曲線,得回歸方程為A=5.5886×103ρ-2.0127×104(r=0.999 1)。結果表明,雷公藤紅素在40~200 μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好線性關系。
精密度試驗
精密吸取同一雷公藤紅素對照品溶液20 μL,連續(xù)進樣6次,測得雷公藤紅素的峰面積RSD為1?96%,結果表明儀器精密度良好。取同一供試品溶液,分別于0、2、4、6、8、12 h進樣,依法測定,結果雷公藤紅素峰面積的RSD為2?98%,表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。取同一批次的獨子藤藥材,稱取5份,按“2.3”項下方法處理并進樣測定,結果雷公藤紅素峰面積的RSD為2.59%,表明本方法重復性良好。
加樣回收率試驗
取獨子藤藥材6份,各5 g,精密稱定,分別按低、中、高不同質量精密加入雷公藤紅素對照品,按“2.3”項下方法制備供試品溶液,依法測定,計算回收率,結果見表1。雷公藤紅素為木栓烷型三萜類化合物,是雷公藤片、雷公藤多苷片等治療類風濕病制劑的有效成分之一,主要來源于中藥雷公藤的根皮,具有抗炎、免疫抑制及抗腫瘤等多種藥理活性[3]。中美科學家于2006年聯(lián)合發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素的抗癌新機制[4],引發(fā)了雷公藤紅素抗癌活性研究的熱潮。我們在獨子藤的化學成分研究中發(fā)現(xiàn)該植物根中富含雷公藤紅素,是一種潛在的雷公藤紅素植物資源,具有重要開發(fā)價值。但至今尚未見有關獨子藤中雷公藤紅素含量測定的文獻報道。本文建立了獨子藤中雷公藤紅素的含量測定方法,對合理開發(fā)獨子藤植物資源、促進雷公藤紅素的深入研究,均具有重要意義本文方法測得獨子藤中雷公藤紅素的平均質量分數(shù)為0.055 5%,相對較高,提示可將獨子藤作為雷公藤紅素的藥用植物資源加以開發(fā)利用,具有重要意義。且雷公藤紅素的毒性很大,建立并完善雷公藤紅素的含量測定方法,亦有助于安全合理地利用獨子藤藥材。
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