生物實驗報告
在當(dāng)下這個社會中,報告的適用范圍越來越廣泛,我們在寫報告的時候要注意語言要準(zhǔn)確、簡潔。那么什么樣的報告才是有效的呢?下面是小編精心整理的生物實驗報告,歡迎閱讀,希望大家能夠喜歡。
生物實驗報告1
一觀察洋蔥表皮細(xì)胞
實驗?zāi)康模和ㄟ^觀察洋蔥表皮細(xì)胞,說明植物體是由細(xì)胞組成的實驗材料::顯微鏡、洋蔥、鑷子、滴管、水、載玻片、針、蓋玻片、吸水紙、紗布。實驗步驟:
。ㄒ)制做臨時裝片。
。1)用紗布將載玻片、蓋玻片擦干凈。
。2)用液管在載玻片上滴一滴清水。
。3)用鑷子在洋蔥鱗片葉上撕下一小片表皮。
。4)將撕下的表皮放入載玻片上的水滴中,用針將其展開。
(5)用鑷子夾住蓋玻片,先將一邊接觸載玻片的水滴邊經(jīng)再慢慢把蓋玻片放平,制成臨時切片。
。4)在蓋玻片的翼側(cè)滴加稀碘液,用吸水紙從蓋玻片的另一側(cè)吸引,使染液浸潤標(biāo)本的全部。
。ǘ┌惭b臨時裝片:將臨時切片放到顯微鏡上,調(diào)整顯微鏡與臨時切片位置,直到可以觀察到清晰的圖像為止實驗圖像:
200倍800倍
實驗結(jié)論:洋蔥表皮是由無數(shù)細(xì)胞構(gòu)成的,有明顯的細(xì)胞核,細(xì)胞壁,細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)。
二.觀察人的口腔上皮細(xì)胞的實驗教案
1、學(xué)習(xí)要求:
1.制作和觀察人的口腔上皮細(xì)胞臨時裝片。2.認(rèn)識人的口腔上皮細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)。
2、材料用具:
生理鹽水,稀碘液,消毒牙簽,滴管,紗布,鑷子,吸水紙,載玻片,蓋玻片,顯微鏡。
3、實驗方法和步驟:
1.用潔凈的紗布將載玻片和蓋玻片擦拭干。2.在載玻片中央滴一滴生理鹽水。
3.用消毒牙簽在口腔內(nèi)側(cè)壁輕刮幾下放在生理鹽水中。
4.用鑷子夾起蓋玻片,使它的一邊先接觸載玻片上的水滴,再將蓋玻片緩緩放平蓋在水滴。
5.在蓋玻片的一側(cè)滴加幾滴稀碘液,用吸水紙在蓋玻片的另一側(cè)吸引,使碘液浸潤標(biāo)本的全部。
總結(jié)步驟:
擦-→滴-→取-→蓋-→染-→吸五、繪制人的口腔上皮細(xì)胞
三.測定某種食物中的能量
實驗?zāi)繕?biāo)一顆花生種子含有多少能量?
實驗器材或藥品 水
實驗探究過程 現(xiàn)象
分析及結(jié)論
1、在錐形瓶中裝30ml水
實驗前水溫:
2、把花生固定在解剖20℃、20℃、24℃
針上
試驗后水溫:
3、在酒精燈上點燃花73℃、78℃、68℃
4.2J生并盡快把花生放到錐
溫差:×51×4.2=6300J
形瓶下面 53℃、58℃、44℃ 、待花生完全燒完后,平均值:51.666℃
一顆花生種子約含有6300J
實驗結(jié)的能量論
四.探究饅頭在口腔中的變化實驗報告
一、問題的提出:取一塊饅頭放到口中咀嚼?谇恢械酿z頭要經(jīng)過牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及與唾液的混合。細(xì)細(xì)品嘗這時的饅頭,你能嘗出一些甜味來。饅頭變甜是否與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌有關(guān)呢?如果有關(guān),它們各起什么作用呢?饅頭變甜是否是淀粉發(fā)生了變化?
二、作出假設(shè)饅頭變甜與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌都有關(guān)。饅頭變甜是因為淀粉被唾液中的唾液淀粉酶分解成了帶有甜味的麥芽糖。在這個過程中,通過牙齒的咀嚼將饅頭嚼碎,舌的攪拌使饅頭碎屑與唾液充分混合。
三、制定計劃(一)實驗原理
饅頭變甜應(yīng)該是成分中糖類發(fā)生變化。饅頭的主要成分是淀粉,因此本實驗利用淀粉遇碘變藍(lán)的特性,以及口腔中的溫度為37℃的常識?刂谱兞客僖海约澳M牙齒的咀嚼作用和舌的攪拌作用。三支試管,兩個對照實驗。一支試管作為實驗組,另兩支試管作為對照組。如果模擬牙齒的咀嚼功能、舌的攪拌功能并加入唾液,滴入碘液后,實驗組的試管內(nèi)沒有變成藍(lán)色,說明饅頭中淀粉的變化與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌都有關(guān)。如果變成藍(lán)色,則說明淀粉沒有被分解,饅頭變甜與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌沒有關(guān)系。(二)實驗變量的控制
兩個對照實驗。一個對照實驗的實驗變量是唾液,實驗組內(nèi)加入唾液2ml,對照組試管加入2ml清水。另一個對照實驗的實驗變量是饅頭塊的狀態(tài):實驗組的饅頭塊用刀切碎,放入試管中并震蕩試管,對照組的饅頭塊不做任何處理,直接整塊放入試管中,并且不震蕩試管。
。ㄈ⿲嶒灧桨笇嶒灢牧嫌镁撸吼z頭塊(三小塊等大)試管(三支)燒杯(三個)盛唾液的小燒杯滴管溫度計石棉網(wǎng)三腳架碘液小刀小木板
1.取新鮮的饅頭,切成大小相同的A、B、C三小塊。將A塊和B塊分別用刀細(xì)細(xì)地切碎,拌勻(模擬牙齒的咀嚼和舌的攪拌),C塊不做任何處理。
2.用涼開水將口漱凈,口內(nèi)含一塊消毒棉絮。約1分鐘之后,用
干凈的鑷子取出棉絮,將棉絮中的唾液擠壓到小燒杯中。
3.取3支潔凈的試管,分別編上(1)、(2)、(3)號,然后做如下處理:
將A饅頭碎屑放入(1)號試管中,注入2ml唾液并震蕩試管;將B饅頭碎屑放入(2)號試管,注入2ml清水并震蕩試管;將C饅頭放入(3)號試管,不震蕩。將三支試管一起放入37℃左右的溫水中。4.5-10分鐘后,取出這三支試管,各滴加2滴碘液,搖勻。然后,觀察并記錄各試管中的顏色變化。四:實施計劃
按確定的探究計劃進行實驗,觀察實驗現(xiàn)象。可見,(1)號試管中沒有變成藍(lán)色;(2)號試管變成藍(lán)色;(3)號試管中的饅頭塊部分變成藍(lán)色。
五、分析實驗結(jié)果,得出結(jié)論
分析實驗現(xiàn)象,(1)號試管中滴入碘液后,沒有變成藍(lán)色,說明試管中已經(jīng)沒有淀粉,淀粉被唾液中的唾液淀粉酶分解成麥芽糖了,麥芽糖沒有遇碘變藍(lán)的特性,所以滴入碘液后不變藍(lán)。(2)號試管中加入的是清水和饅頭碎屑,水沒有消化淀粉的作用,因此,滴入碘液后,饅頭碎屑中淀粉遇碘變成藍(lán)色。(3)號試管中只有部分變成藍(lán)色,說明饅頭與唾液的接觸不充分,只有部分淀粉被分解。由此,得出結(jié)論:說明饅頭變甜與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌都有關(guān)系。因為上述活動模擬了消化與唾液的分泌以及牙齒的咀嚼、舌的攪拌,(1)號試管中的饅頭接觸到了足量的唾液,并被消化。
生物實驗報告2
第十次實驗分離產(chǎn)淀粉酶微生物
學(xué)院:生命科學(xué)學(xué)院
專業(yè):生物科學(xué)類
年級:20xx級
姓名:
學(xué)號:1007040085
20xx年XX月XX日
實驗十分離產(chǎn)淀粉酶的微生物
一、實驗?zāi)康?/strong>
1、熟悉常用微生物培養(yǎng)基(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)的配制方法。
2、學(xué)習(xí)各種無菌操作技術(shù),并用此技術(shù)進行為微生物稀釋分離、劃線分離接種。
3、用平板劃線法和稀釋涂布平板發(fā)分離微生物。
4、認(rèn)識為微生物存在的普遍性,體會無菌操作的重要性。
5、掌握分離產(chǎn)淀粉酶微生物的試驗方法和步驟,了解產(chǎn)淀粉酶的微生物種類及形態(tài)。
二、實驗原理
土壤是微生物生活的大本營,是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同,一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多,其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥,偏堿性、有機質(zhì)豐富的土壤中放線苗數(shù)量較多;酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少,而在水果表皮、葡萄園、果園土中數(shù)量多些。本次實驗從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的微生物,應(yīng)該取那些富含產(chǎn)淀粉酶的微生物的土樣。從復(fù)雜的微生物群體中獲得只含有一種或某一類型微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的方法有
1、簡單單細(xì)胞挑取法
2、平板分離法和稀釋涂布平板法
此次實驗采取的是平板分離法和稀釋涂布平板法結(jié)合,該方法操作簡單,普遍用于微生物的分離與純化。其原理包括:
1)稀釋后的細(xì)胞懸液圖不在平板上可以分離得單個菌株
2)在適合于待分離微生物的生長條件(如營養(yǎng)、酸堿度、溫度與氧等)下培養(yǎng)微生物,或加入某種抑制劑造成只利于待分離微生物的生長,而抑制其他微生物生長的環(huán)境,從而淘汰一些不需要的微生物。
3)微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個菌落可以是由一個細(xì)胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取單菌落而獲得純培養(yǎng)。獲得單菌落的方法可通過稀釋涂布平板或平板劃線等方法完成。
以淀粉作為惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)未分離細(xì)菌,能產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌能生長,且菌落周圍出現(xiàn)透明圈(淀粉不透明,被消化后變透明),則產(chǎn)淀粉酶微生物被分離出來。本實驗采用透明圈檢驗法檢測培養(yǎng)物中是否有產(chǎn)淀粉酶微生物的生長。
三、實驗儀器及試劑
1、器材:
培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、普通光學(xué)顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環(huán)、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、、天平、濾紙、pH試紙等。
2、試劑:
配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的原料(牛肉膏、NaCl、瓊脂、蛋白胨)、淀粉、盧戈氏碘液、蒸餾水、250ml三角瓶中裝90ml無菌水加20粒玻璃珠,作稀釋用等。
3、土樣:
取自貴州大學(xué)農(nóng)生樓后土壤10g,地下10cm左右。
四、實驗步驟:
1、配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基:
1)配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基400ml(用于11個平皿和7支試管斜面)牛肉膏0.5%…………………………………2g
蛋白胨1%……………………………………4g
NaCl0.5%…………………………………..2g
瓊脂2%……………………………………..8g
淀粉0.5%........................................2g
pH……………………………………7.0~7.2
(2)無菌水的制備
分別取9ml蒸餾水加入5支試管中,加塞后用報紙包扎捆綁,放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌備用。取90ml蒸餾水加入250ml三角瓶中,同樣的操作,滅菌備用。
。3)器皿的準(zhǔn)備
將刻度吸管用報紙包扎,培養(yǎng)皿裝入專用滅菌杯分別放入高溫滅菌箱滅菌備用。
2)倒11個平板和7支試管斜面,包扎,0.1Mp、121℃、滅菌30min.
2、制備土壤稀釋液:
稱取土樣10g,放入盛有250ml無菌水的帶有玻璃珠的三角瓶中,振蕩搖勻10min使土和水充分混合,然后用移液槍從三角瓶中吸取1ml(此操作要求無菌操作),加入另一盛有9ml無菌水的試管中,混合均勻,以此類推分別制成制成0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001不同稀釋度的土壤溶液。
3、涂布培養(yǎng):
0.00001、0.000001濃度的土壤稀釋液作為涂布平板培養(yǎng)的對象,將其分別涂布在3個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中,共6個培養(yǎng)基,標(biāo)號,37°C溫箱培養(yǎng)48h。
4、選取目的菌株:
兩天后對土壤溶液的微生物培養(yǎng)基進行觀察,并取兩個菌落形態(tài)完全一致的分散的單個菌落,對其中一個噴灑盧戈氏碘液,觀察其菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈,如果出現(xiàn)透明圈說明此菌株產(chǎn)淀粉酶,是目的菌株,記錄細(xì)菌明顯的性狀。
生物實驗報告3
一、實驗?zāi)康模?/strong>
1、掌握顯示細(xì)胞中過氧化物酶反應(yīng)的原理和方法。2.了解細(xì)胞凋亡的生物學(xué)意義
3、掌握凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)檢測方法
二、實驗原理:
1、細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物,用聯(lián)苯胺處理標(biāo)本,細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色的聯(lián)苯胺藍(lán),進而變?yōu)樽厣a(chǎn)物,因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來判定過氧化物酶的有無或多少。中間產(chǎn)物藍(lán)色聯(lián)苯胺是不穩(wěn)定的,無需酶的參加即可氧化為棕色化合物。
2、細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞在生理或病理條件下,遵循自身的程序,自己結(jié)束其生命的過程。它是一個主動的、高度有序的,基因控制的,一系列酶參與的過程。
3、凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮;細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細(xì)胞膜有小泡狀形成;晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體;根據(jù)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特征進行顯微觀察是檢測細(xì)胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。
三、實驗步驟:
細(xì)胞中過氧化物酶的顯示
1、在載片上滴一滴PBS緩沖液;
2、取骨髓細(xì)胞:用斷頸法處死小鼠,立即剪取后肢,去除肌肉,剝出后肢股骨,剪開股骨一端,用牙簽尖的一端插入剪開的小孔中,摳取少許骨髓細(xì)胞置滴有PBS的載片上;
3、涂片:用另一玻片將骨髓細(xì)胞沿一個方向涂布推開,室溫晾干;
4、媒染:在涂片上滴0.5%硫酸銅液,以蓋滿涂片為宜,處理30秒-1分鐘。5、傾去硫酸銅液,直接滴入聯(lián)苯胺混合液反應(yīng)6分鐘(以蓋滿涂片為宜)6、清水沖洗,番紅復(fù)染2min。
7、鏡檢:清水沖洗,室溫晾干,先低倍鏡下觀察,后換高倍鏡下觀察(油鏡100×)
細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測與觀察吉姆薩染色:
1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞3、95%乙醇固定5min
4、PBS緩沖液洗2次
5、吉姆薩染色液染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液
7、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。吖啶橙染色:
1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞
3、甲醇:冰醋酸(3:1)固定5min4、PBS緩沖液洗2次每次1min
5、0.01%吖啶橙染色液在避光環(huán)境下染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液
6、選用藍(lán)光激發(fā)濾片在熒光顯微鏡下觀察。
四、結(jié)果與分析:
1、根據(jù)隨機選擇的幾個視野的統(tǒng)計,該樣品的細(xì)胞凋亡率=227/506×100=44.9
Hela細(xì)胞凋亡過程中核染色質(zhì)的形態(tài)變化(吖啶橙染色)
五、思考題:
1、細(xì)胞凋亡的調(diào)控機制
細(xì)胞凋亡是一個受基因調(diào)控、眾多細(xì)胞膜受體和胞漿蛋白參與的細(xì)胞主動自殺過程,其觸發(fā)因素多種多樣,包括細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)因子和抑制因子對細(xì)胞凋亡的調(diào)控。
2、細(xì)胞凋亡的特征
凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮;細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細(xì)胞膜有小泡狀形成;晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體。
3、研究細(xì)胞凋亡的方法
定性的研究方法:常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉(zhuǎn)瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學(xué)觀察(普通光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡)
定量或半定量的研究方法:各種流式細(xì)胞儀方法、原位末端標(biāo)記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。
生物實驗報告4
實驗日期: 年月 日
組長: 組員:
一、實驗要求
1、練習(xí)使用顯微鏡,學(xué)習(xí)規(guī)范的操作方法。
2、能夠獨立操作顯微鏡。
3、能夠?qū)⒉F瑯?biāo)本移動到視野中央,并看到清晰的圖像。
二、實驗原理
三、材料用具
顯微鏡,寫有“上”字的玻片,動物、植物玻片標(biāo)本,擦鏡紙,紗布。
四、方法與步驟
(一)取鏡和安放
1、右手握住鏡臂,左手托住鏡座
2、把顯微鏡放在實驗臺上,略偏左。安裝好目鏡和物鏡。
。ǘ⿲
3、轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器,使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔(物鏡的前端與載物臺要保持2厘米的距離)。
4、把一個較大的光圈對準(zhǔn)通光孔。左眼注視目鏡內(nèi)(右眼睜開,便于以后同時畫圖)。轉(zhuǎn)動反光鏡,使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過目鏡,以看到白亮的視野。
(三)觀察
5、把所要觀察的玻片標(biāo)本(也可以用印有“e”字的薄紙片制成)放在載物臺上,用壓片夾壓住,標(biāo)本要正對通光孔的中心。
6、轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒緩緩下降,直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止(眼睛看著物鏡,以免物鏡碰到玻片標(biāo)本)。
7、左眼向目鏡內(nèi)看,同時反方向轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒緩緩上升,直到看清物像為止。再略微轉(zhuǎn)動細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,使看到的物像更加清晰。
注意事項:
1、實驗完畢,把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器,把兩個物鏡偏到峽谷旁。最后把顯微鏡放進鏡箱里,
生物實驗報告5
一、實驗?zāi)康?/strong>
1. 初步學(xué)會探索酶催化特定化學(xué)反應(yīng)的方法。
2. 探索淀粉酶是否只能催化特定的化學(xué)反應(yīng)。
二、實驗原理
淀粉和蔗糖都是非還原糖,它們在酶的催化作用下都能水解成還原糖,還原糖能夠與
斐林試劑發(fā)生氧化還原反應(yīng),生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。
用淀粉酶分別催化淀粉溶液和蔗糖溶液,再用斐林試劑鑒定溶液中有無還原糖,就可
以看出淀粉酶是否能催化這兩種化學(xué)反應(yīng)。
三、材料用具
滴管、試管、火柴、試管架、溫度計、三腳架、石棉網(wǎng)、酒精燈、燒杯、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的
新鮮淀粉酶溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的可溶性淀粉溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的蔗糖溶液、斐林試劑
四、實驗過程(見書P47)
五、討論
1.制備的可溶性淀粉溶液,必須完全冷卻后才能使用。為什么?
。玻畠芍г嚬鼙貢r,為什么要控制在60 ℃左右(低于50 ℃或高于75 ℃)?
3.如果2號試管也產(chǎn)生了磚紅色沉淀,可能是由哪些原因造成的?
生物實驗報告6
實驗名稱:
用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細(xì)胞質(zhì)流動
一、實驗?zāi)康?/strong>
1.初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。
2.觀察高等植物的葉綠體在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的形態(tài)和分布
二、實驗原理
高等植物的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體可以運動,改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的光照,又不至于被強光灼傷。在強光下,葉綠體以其橢球體的側(cè)面朝向光源;在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的葫蘆蘚,其小葉內(nèi)葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。活細(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動狀態(tài),觀察細(xì)胞質(zhì)的流動,可以用細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體的運動做為標(biāo)志。
三、材料用具
蘚類的葉,新鮮的黑藻,顯微鏡,載玻片,蓋玻片,滴管,鑷子,刀片,培養(yǎng)皿,鉛筆
四、實驗過程(見書P30)
1.制作蘚類葉片的臨時裝片
2.用顯微鏡觀察葉綠體
3.制作黑藻葉片臨時裝片
4.用顯微鏡觀察細(xì)胞質(zhì)流動
物理實驗報告 ·化學(xué)實驗報告 ·生物實驗報告 ·實驗報告格式 ·實驗報告模板
五、討論
1.細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體是否靜止不動,為什么?
2.葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關(guān)系?
3.植物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動狀態(tài),這對于活細(xì)胞完成生命活動有什么意義?
4.用鉛筆畫一個葉片細(xì)胞,標(biāo)出葉綠體的大致流動方向。
生物實驗報告7
一、實驗?zāi)康模?/strong>
1、學(xué)會如何使用顯微鏡觀察細(xì)胞;
2、了解細(xì)胞的結(jié)構(gòu);
3、學(xué)會制作臨時裝片。
二、實驗材料:(實驗材料可換)松針、動物血液、動物神經(jīng)細(xì)胞永久裝片
三、實驗用具: 載玻片、蓋玻片、蒸餾水、滴管、鑷子、土豆、刀片、顯微鏡(物鏡5X、10X、40X)
四、方法步驟:
1、制作松針的臨時切片:
。1)取干凈的載玻片一個平置于試驗臺上,用滴管在載玻片中央滴一滴蒸餾水。
。2)將土豆切成條狀(截面約:0.5X0.5cm)取兩條,將一根松針夾在兩個土豆條之間,用刀片削成盡量薄的薄片,削時,手腕不動,靠大臂帶動小臂移動刀片。切片數(shù)次。從中選取較薄的切片,置于載玻片的水滴上。
。3)從一側(cè)輕輕蓋上蓋玻片,不要產(chǎn)生氣泡。用吸水紙輕輕吸去蓋玻片周圍的水滴,即完成臨時切片的制作。
2、觀察切片:
。1)取出顯微鏡,置于試驗臺上靠左的位置,打開光源。
。2) 將上步制作好的切片置于顯微鏡的載物臺上,調(diào)整載物臺位置,使蓋玻片對準(zhǔn)光源。
。3)使用5X物鏡觀察切片,使松針切片在視野中心,換成10X物鏡,觀察松針葉面橫切結(jié)構(gòu)。
。4)換成40X物鏡觀察,注意細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)結(jié)構(gòu),畫圖。
3、動物血液臨時裝片的制作及觀察(除了不用切片,其他類似)
4、 動物神經(jīng)細(xì)胞永久裝片的觀察。
五、反思:
1、松針的葉面結(jié)構(gòu)是什么樣的?
2、動物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)是什么樣的?與植物細(xì)胞又什么不同?
3、顯微鏡的物鏡倍數(shù)愈大,視野的亮度如何?物體的大小如何?
4、如何調(diào)節(jié)焦距?
5、如何才能使切片盡量的?切片的厚薄對顯微鏡下觀察的效果有什么影響。
生物實驗報告8
實驗一:練習(xí)使用顯微鏡
目的要求:
1.練習(xí)使用顯微鏡,學(xué)會規(guī)范的操作方法。
2.能夠獨立操作顯微鏡。
3.能夠?qū)?biāo)本移動到視野中央,并看到清晰的圖象。
材料用具:顯微鏡,寫有“上”字的玻片,動、植物玻片標(biāo)本,擦鏡紙,紗布。
方法步驟
1.右手握住鏡臂,左手托住鏡座。
2.把顯微鏡放在實驗臺距邊緣7厘米左右處,略偏左。安裝好目鏡和物鏡。
3.動轉(zhuǎn)換器,使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔。
4.把一個較大的光圈對準(zhǔn)通光孔。一只眼注視目鏡內(nèi),另一只眼睜開。轉(zhuǎn)動反光鏡,使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過目鏡可以看到白亮的圓形視野。
5.把所要觀察的玻片標(biāo)本放在載物臺上,用壓片夾壓住,標(biāo)本要正對通光孔的中心。
6.轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒緩緩下降,直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止此時眼睛一定要看著物鏡)。
7.一只眼向目鏡內(nèi)看,同時逆時針方向轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒緩緩上升直到看清物象為止。再略微轉(zhuǎn)動細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,使看到的物象更加清晰。
8.練習(xí)將所觀察的標(biāo)本移到視野中央,先移動一下標(biāo)本,物象朝相反的方向移動。說明了在目鏡中看到的像是真實的像的倒像。
注意事項
實驗完畢,把顯微鏡的外表擦拭干凈。如需擦拭目鏡和物鏡,請用擦鏡紙。轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器,把兩個物鏡偏到兩旁,并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進鏡箱里,送回原處。
討 論
1.顯微鏡的使用步驟有哪些?
答:1、取鏡和安放2、對光3、觀察(放片、調(diào)焦) 4、清潔與收鏡
2.使用顯微鏡觀察時,為什么在下降鏡筒時眼睛要注視物鏡?
答:物鏡把載玻片壓碎,也容易劃傷物鏡。
3.在顯微鏡下能看清寫在不透明紙上的“上”字嗎?
答:看不到,不透明的紙會阻擋光線從物鏡進入光筒再從目鏡射出,所以可能什么也看不見。
實驗時間:20xx.9.15
實驗二:觀察植物細(xì)胞
實驗?zāi)康模?/p>
1、制作植物細(xì)胞的臨時裝片,學(xué)習(xí)制作臨時裝片的基本辦法.
2、認(rèn)識植物細(xì)胞等基本結(jié)構(gòu). 3、練習(xí)畫細(xì)胞結(jié)構(gòu)圖.
實驗準(zhǔn)備:
分組實驗器材:顯微鏡、洋蔥、小刀、清水、滴管、吸水紙、載玻片、蓋玻片、鑷子、放大鏡等。
實驗過程:
一、制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本
1、用潔凈地紗布把載玻片擦拭干凈。
2、把載玻片放在實驗臺上,用滴管在載玻片的中央滴一滴清水。
制作臨時裝片
3、用鑷子從洋蔥鱗片葉內(nèi)側(cè)撕取一小塊透明在膜——內(nèi)表皮。把撕下的內(nèi)表皮浸入載玻片的水滴中,用鑷子把它展平。
4、用鑷子夾起蓋玻片,是它的一邊先解除4載玻片上的水滴,然后緩緩地放下,蓋在要觀察的材料上,這樣才能避免蓋玻片下面出現(xiàn)氣泡而影響觀察。
染色
5、把一滴稀碘液滴在蓋玻片的一側(cè)。
6、用吸水紙從蓋玻片的另一側(cè)吸引,使染液浸潤標(biāo)本的全部。
三、觀察洋蔥表皮細(xì)胞
利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞,先用低倍鏡下觀察,再在高倍鏡下觀察。
四、洋蔥鱗片葉表皮細(xì)胞圖。
五、實驗結(jié)束。
回收實驗器材,整理實驗桌。
實驗時間: 20xx.9.22
實驗三:觀察人體口腔上皮細(xì)胞
目的要求:
1. 制作和觀察人體口腔上皮細(xì)胞的臨時裝片
2. 認(rèn)識人體口腔上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)
3. 熟練畫細(xì)胞結(jié)構(gòu)圖
材料用具:
顯微鏡、吸水紙、載玻片、蓋玻片、生理鹽水、碘液、鑷子、紗布、漱口杯、牙簽 方法步驟
(一) 制作人口腔上皮細(xì)胞的臨時裝片
1. 用紗布擦凈載玻片、蓋玻片(很薄,應(yīng)輕擦)
2. 在載玻片中央滴一滴生理鹽水(0.9%),說明:為什么用0.9%的生理鹽水,觀
察洋蔥表皮裝片用清水,都是為了讓細(xì)胞所處的環(huán)境和它們所生活的環(huán)境相同,
不至于脹破或變形,使細(xì)胞保持原狀。
3. 漱凈口。目的:將口腔的飯粒清除,以保證所取的細(xì)胞純度。
4. 用牙簽在口腔內(nèi)壁輕劃幾下,將上面附有碎屑涂抹在生理鹽水中,盡量涂均勻。
5. 蓋蓋玻片。用鑷子夾起蓋玻片,使它的一側(cè)先接觸載玻片的水滴,然后慢慢放
平(注意:避免產(chǎn)生氣泡)。
6. 染色。①在蓋玻片一側(cè)滴加稀碘液,②用吸水紙在蓋玻片另一側(cè)吸引,使染液
浸潤標(biāo)本的全部。
(二) 用顯微鏡觀察。
使用顯微鏡①安放②對光③放置玻片標(biāo)本,調(diào)節(jié)焦距,用眼觀察,在視野中會看到被染成桔黃色的上皮細(xì)胞.
。ㄈ├L圖:
人體口腔上皮細(xì)胞模式圖
(四)整理:清潔玻片,廢物放在指定位置。
歸納討論:人的口腔上皮細(xì)胞有哪些基本結(jié)構(gòu),植物細(xì)胞和動物細(xì)胞相同和不同之處。 答:人的口腔上皮細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核;植物細(xì)胞與動物細(xì)胞相比,細(xì)胞壁、葉綠體和液泡是植物細(xì)胞特有的。
實驗時間: 20xx.9.27
實驗四:觀察人體的基本組織
目的要求:
1.觀察人體基本組織的永久切片,認(rèn)識人體的四種基本組織;
2.描述同一種組織中細(xì)胞的共同特點;
3.描述不同組織中細(xì)胞形態(tài)上的不同之處;
4.根據(jù)觀察,概述組織的共同特點,形成組織的概念。
材料器具:
顯微鏡;扁平上皮、立方上皮、柱狀上皮等上皮組織玻片;橫紋肌、骨骼肌、心肌等肌肉組織玻片;骨、軟骨、血液、韌帶、肌腱、脂肪等結(jié)締組織玻片;神經(jīng)組織的玻片。
方法步驟:
1.根據(jù)教師提供的玻片,逐個在顯微鏡低倍鏡下認(rèn)真觀察,注意細(xì)胞的形態(tài)特征和細(xì)胞間的聯(lián)系特點。
2.根據(jù)觀察,同組間的同學(xué)互相討論,認(rèn)真填寫下表。
主要分布位組織類型 主要特征 功能 舉例 置
皮膚,消化 皮膚,小腸腺上皮組織 排列緊密形成表面 保護,分泌 道 上皮
四肢,軀 骨骼肌,平滑肌肉組織 呈長條狀緊密排列 干,內(nèi)臟器 收縮,舒張 肌 官
支持,連接, 軟骨,軟組結(jié)締組織 細(xì)胞之間間隙較大 全身各處 保護,營養(yǎng) 織,血液
產(chǎn)生傳導(dǎo)興神經(jīng)組織 形狀獨特呈發(fā)散狀 神經(jīng)系統(tǒng) 神經(jīng)纖維 奮
實驗時間:20xx.10.26
實驗五:觀察葉片結(jié)構(gòu)
目的要求:
1,練習(xí)徒手切片.
2認(rèn)識葉片的結(jié)構(gòu).
3畫葉片的表皮細(xì)胞和保衛(wèi)細(xì)胞圖.
材料用具:
新鮮葉片,顯微鏡,雙面刀片,鑷子,載玻片,蓋玻片,葉片的永久切片,盛有清水的培養(yǎng)皿,滴管,吸水紙,碘液,紗布,毛筆,小木板.
方法步驟:
一,練習(xí)徒手切片,制作葉片橫切片的臨時切片
1,把新鮮的葉片平放在小木板上.
2,右手捏緊并排的兩片刀片,沿著圖中虛線的方向,迅速切割.
3,刀片的夾縫中春游切下的薄片.要多切幾次(每且一次,刀片要咱蘸一下稅)。把切下的薄片放入水中。
4,用毛筆蘸出最薄的一片,制成臨時切片。
二,觀察葉片的結(jié)構(gòu)
1用顯微鏡先觀察葉片橫切面的臨時切片,再觀察葉片的永久橫切片。
2在顯微鏡下分清業(yè)的表皮,葉肉和葉脈。
三,觀察葉片的下表皮
1用鑷子撕下一小塊葉片(如蠶豆葉片的下表皮,制成臨時裝片。
2 用顯微鏡進行觀察,看一看葉片下表皮的細(xì)胞是什么樣子的,下表皮上有沒有氣孔?下表皮氣孔多于上表皮。
四,實驗結(jié)果。
討論:保衛(wèi)細(xì)胞和它周圍的細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有什么不同?保衛(wèi)細(xì)胞的這種結(jié)構(gòu)特點對蒸騰作用有什么意義?
答:當(dāng)水分充足時,保衛(wèi)細(xì)胞膨脹張開,則氣孔張開,這時,蒸騰作用很強;當(dāng)水分不充足時,保衛(wèi)細(xì)胞收縮關(guān)閉,則氣孔關(guān)閉,這時,蒸騰作用變?nèi)酢1Pl(wèi)細(xì)胞能夠控制氣孔開關(guān),所以也就能起到促進或減緩蒸騰作用的意義。
實驗時間:20xx.12.5
生物實驗報告9
生物學(xué)是一門實驗科學(xué)。生物新課程倡導(dǎo)面向全體學(xué)生、提高生物科學(xué)素養(yǎng)和探究性學(xué)習(xí)的課程理念。其中探究學(xué)習(xí)是讓學(xué)生在主動參與的過程中進行學(xué)習(xí),讓學(xué)生在探究問題的活動中獲取知識,了解科學(xué)家的工作方法和思維方法,學(xué)會科學(xué)研究所需要的各種技能,領(lǐng)悟科學(xué)觀念,培養(yǎng)科學(xué)精神。這種學(xué)習(xí)的方式的中心是針對問題的探究活動,當(dāng)學(xué)生面臨各種讓他們困惑的問題時,他就要想法尋找答案。
在解決問題時,要對問題進行推理、分析,找出問題解決的方向,然后通過觀察、實驗來收集事實,通過對獲得的資料進行歸納、比較、統(tǒng)計分析,形成對問題的解釋。最后通過討論和交流進一步澄清事實,發(fā)現(xiàn)新的問題,對問題進行更深入的研究。
在此背景理念依據(jù)下,在教學(xué)中教學(xué)模式也將發(fā)生根本的改變,生物課將更多地開展學(xué)生的試驗、討論、交流等活動。引導(dǎo)學(xué)習(xí)教學(xué)模式就是在這種背景下構(gòu)建的。具體的模式結(jié)構(gòu):問題——閱讀、實驗——分析、推理、歸納、討論——結(jié)論。
在運用這種模式的過程中我有下面幾點感觸:
1、在教師的引導(dǎo)下學(xué)生可帶者問題去閱讀、分析、討論資料,達(dá)到解決問題的目的。比如:在學(xué)習(xí)〈空中飛行的動物〉時,教師可這樣引導(dǎo)學(xué)生;想一想,我們?nèi)艘朐谔炜兆杂勺栽诘娘w翔必須先解決什么問題?
學(xué)生思考后說;一是,解決了動力問題。二是,解決了地心引力問題。教師隨后提出問題:鳥是如何解決這些問題的?引導(dǎo)學(xué)生思考,讓學(xué)生帶著問題去看書、閱讀、討論、交流、的出結(jié)論。這樣既可提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣,改變學(xué)習(xí)方式,又符合新課程的要求。
2、合理開發(fā)的有效地利用一切可以利用的課程資源是實現(xiàn)課程目標(biāo),轉(zhuǎn)變學(xué)生學(xué)習(xí)方式的關(guān)鍵條件。知識、技能、經(jīng)驗、活動方式方法等都是課程資源。在學(xué)習(xí)〈水中生活的動物〉時,對于生活在我這些地方的學(xué)生來說,對水中的動物了解不多,而且上課時還不能做試驗,學(xué)生缺少感性的認(rèn)識,這時教師就要引導(dǎo)學(xué)生開發(fā)自己已有的課程資源。如:學(xué)習(xí)魚鰭的作用時引導(dǎo)學(xué)生想想:獨槳船和雙槳船他們的槳各起什么作用?在學(xué)習(xí)魚兒離開水為什么會死?教師可引導(dǎo)學(xué)生回憶:頭發(fā)在水中水什么樣的?從水中出來時又是什么樣的?這樣就很容易理解知識,解決了問題。
3、信息化是當(dāng)今世界經(jīng)濟和社會發(fā)展的大趨勢。新課程注重現(xiàn)代信息技術(shù)與生物新課程的整合。這樣可有效地應(yīng)用數(shù)字化的優(yōu)勢達(dá)到學(xué)習(xí)目標(biāo)。教師用編制成的演示文稿、多媒體課件來引導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)或作為學(xué)生自主學(xué)習(xí)的資源。
在課程學(xué)習(xí)中,利用諸多的文字處理、圖形圖像處理、信息集成等工具,讓學(xué)生對課程學(xué)習(xí)內(nèi)容進行重組、創(chuàng)作,不僅使學(xué)生獲得知識,而且能夠幫助學(xué)生建構(gòu)知識。但是,教師在制作多媒體課件時,把每個知識點、每個環(huán)節(jié)設(shè)計的過于完美,在教師的引導(dǎo)下學(xué)生很簡單的就可掌握知識,完成教學(xué)任務(wù)。但也存在著弊端,這就是學(xué)生的自主學(xué)習(xí)不到位,在獲得知識的過程中缺少自主探究的過程。這個問題就是我發(fā)現(xiàn)的問題和努力改進的方面。
生物實驗報告10
一、實驗?zāi)康某醪秸莆砧b定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。
二、實驗原理
1.還原糖的鑒定原理
生物組織中普遍存在的還原糖種類較多,常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內(nèi)都含有還原性基團(游離醛基或游離酮基),因此叫做還原糖。蔗糖的分子內(nèi)沒有游離的半縮醛羥基,因此叫做非還原性糖,不具有還原性。本實驗中,用斐林試劑只能檢驗生物組織中還原糖存在與否,而不能鑒定非還原性糖。斐林試劑由質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡藍(lán)色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下,能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式如下:CH2OH—(CHOH)4—CHO+2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH+Cu2O↓+2H2O用斐林試劑鑒定還原糖時,溶液的顏色變化過程為:淺藍(lán)色 棕色 磚紅色(沉淀)。
2.蛋白質(zhì)的鑒定原理
鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時,常用雙縮脲法,使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的成分是質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液(A)和質(zhì)量濃度為0.01g/mL(B)的硫酸銅溶液。在堿性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H2NOC—NH—CONH2)能與Cu2+作用,形成紫色或紫紅色的絡(luò)合物,這個反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵,因此,蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。
3.脂肪的鑒定原理
脂肪可以被蘇丹Ⅲ染成橘黃色,被蘇丹Ⅳ染成紅色
三、實驗過程(見書P18)
四、實驗用品(見書P18)
五、注意
關(guān)于鑒定還原糖的實驗,在加熱試管中的溶液時,應(yīng)該用試管夾夾住試管上部,并放入盛開水的大燒杯中加熱。注意試管底部不要接觸燒杯底部,同時試管口不要朝向?qū)嶒炚,以免試管?nèi)溶液沸騰時沖出試管,造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過于沸騰,可以上提試管夾,使試管底部離開大燒杯中的開水。
2.斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后方可使用,切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。
3.蛋白質(zhì)的鑒定中先加雙縮脲A,再加雙縮脲B六、討論鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的根據(jù)是什么?
生物實驗報告11
質(zhì)粒DNA的提取、純化及檢測
姓名:XXX學(xué)號:2011001400XX年級:20xx級生物基地班 實驗日期:20xx年9月16日—30日組別:6組 同組者:XX
一、【實驗?zāi)康摹?/strong>
1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質(zhì)粒DNA的原理和方法。
2、學(xué)習(xí)并掌握凝膠電泳進行DNA的分離純化的實驗原理。
3、學(xué)習(xí)并掌握凝膠的制備及電泳方法。
4、學(xué)習(xí)并掌握凝膠中DNA的分離純化方法。
二、【實驗原理】
1、質(zhì)粒DNA的制備方法
質(zhì)粒(Plasmid)是獨立存在于染色體外、能自主復(fù)制并能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈DNA分子,分布于細(xì)菌、放線菌、真菌以及一些動植物細(xì)胞中,但在細(xì)菌細(xì)胞中含量最多。細(xì)菌質(zhì)粒大小介于1~200Kb之間,是應(yīng)用最多的質(zhì)粒類群,在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)它們利用宿主細(xì)胞的復(fù)制機構(gòu)合成質(zhì)粒自身的DNA。
質(zhì)粒DNA的制備包括3個步驟:①培養(yǎng)細(xì)菌,使質(zhì)粒DNA大量擴增;②收集和裂解細(xì)菌;③分離和純化質(zhì)粒DNA。主要方法包括:堿裂解法:0。2molNaOH+1%SDS;煮沸裂解法:沸水煮沸40秒;SDS裂解法:10%SDS,一般用于質(zhì)粒大量提取。在實際操作中可以根據(jù)宿主菌株類型、質(zhì)粒分子大小、堿基組成和結(jié)構(gòu)等特點以及質(zhì)粒DNA的用途進行選擇。本實驗選擇堿裂解法提取質(zhì)粒DNA。
2、質(zhì)粒DNA的提取——堿變性提取法
在細(xì)菌細(xì)胞中,染色體DNA和質(zhì)粒DNA均被釋放出來,但是兩者變性與復(fù)性所依賴的溶pH值不同。在pH值高達(dá)12。0的堿性溶液中,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性;共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵斷裂,但兩條互補鏈不完全分離。因為它們在拓?fù)鋵W(xué)上是相互纏繞的。當(dāng)用pH值4。6的KAc(NaAc)高鹽溶液調(diào)節(jié)堿性溶液至中性時,變性的質(zhì)粒DNA可恢復(fù)原來的共價閉合環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)而溶解于溶液中;但染色體DNA不能復(fù)性,而是與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心,與復(fù)性的溶于溶液的質(zhì)粒DNA分離。溶于上清液的質(zhì)粒DNA,可用無水乙醇和鹽溶液,使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性質(zhì)類似,乙醇沉淀
DNA的同時,也伴隨著RNA沉淀,可利用RNaseA將RNA降解。質(zhì)粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白,可通過酚/氯仿抽提除去,最后獲得純度較高的質(zhì)粒DNA。
3、凝膠電泳進行DNA分離純化
電泳(electrophoresis)是帶電物質(zhì)在電場中向著與其電荷相反的電極方向移動的現(xiàn)象。各種生物大分子在一定pH條件下,可以解離成帶電荷的離子,在電場中會向相反的電極移動。凝膠是支持電泳介質(zhì),它具有分子篩效應(yīng)。含有電解液的凝膠在電場中,其中的電離子會發(fā)生移動,移動的速度可因電離子的大小形態(tài)及電荷量的不同而有差異。利用移動速度差異,就可以區(qū)別各種大小不同的分子。因而,凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化DNA的片段,是分子生物學(xué)的核心技術(shù)之一。
凝膠電泳技術(shù)操作簡單而迅速,分辨率高,分辨范圍廣。此外,凝膠中DNA的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠(ethidium bromide,EB)或SYBR Gold染色直接觀察到,甚至含量少至20pg的雙鏈DNA在紫外激發(fā)下也能直接檢測到。需要的話,這些分離的DNA條帶可以從凝膠中回收,用于各種各樣目的的實驗。
分子生物學(xué)中,常用的兩種凝膠為瓊脂糖(agarose)和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑,也能以許多不同的構(gòu)型和方位進行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高,使用于較小分子核酸(5—500bp)的分離和蛋白質(zhì)電泳。它的分辨率非常高,長度上相差1bp或質(zhì)量上相差0。1%的DNA都可以彼此分離,這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行DNA序列分析的分子基礎(chǔ)。雖然它能很快地進行電泳,并能容納較大的DNA上樣量,但是與瓊脂糖凝膠相比,在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長鏈狀多聚物,由β—D—吡喃半乳糖與3,6—脫水—L—吡喃半乳糖組成,相對分子質(zhì)量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右,即可溶化形成清亮、透明的液體,澆在模版上冷卻后形成凝膠,其凝固點為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低,但它的分離范圍更大(50至百萬bp),小片段DNA(50—20000bp)最適合在恒定輕度和方向的電場中水平方向的瓊脂糖凝膠內(nèi)電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作,適用于核酸電泳,測定DNA的相對分子質(zhì)量,分離經(jīng)限制酶水解的DNA的片段,進一步純化DNA等。
瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中,由于核酸有磷酸基而帶有負(fù)電荷,在電場中向正極移動。DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個因素:樣品DNA分子的大小、DNA分子的構(gòu)象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場、緩沖液和溫度。
三、【實驗材料】
1、實驗儀器
培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、50ml離心管、1。5ml塑料離心管(Eppendorf管)、高速離心機、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛(wèi)生紙和記號筆、手套等。
2、實驗試劑
LB培養(yǎng)基,抗生素Ap(氨芐青霉素),溶液Ⅰ,溶液Ⅱ,溶液Ⅲ,RNaseA母液,TE緩沖液,飽和酚,氯仿/異戊醇混合液,酚/氯仿/異戊醇(PCI)混合液,預(yù)冷無水乙醇,TAE電泳緩沖液(10×),上樣緩沖液(6×),瓊脂糖,溴化乙錠(EB),DNA相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物DNA Marker λ/Hind Ⅲ,5mol/L pH 5。2的醋酸鈉。
四、【實驗步驟】
1、準(zhǔn)備實驗
配制LB液體培養(yǎng)基,分裝到100ml的三角瓶中20ml,300ml的三角瓶中50ml,另配LB固體培養(yǎng)基;準(zhǔn)備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒,1。5ml離心管若干于500ml三角瓶中,50ml離心管2個 ,將上述物品包好連同配好的培養(yǎng)基一同滅菌。
2、菌體培養(yǎng)
在含有Ap的LB平板上挑取一環(huán)攜帶有質(zhì)粒pUC19的E。coli DH5單菌落,接種于20mlLB液體培養(yǎng)基中進行37℃振蕩過夜培養(yǎng),培養(yǎng)基中加Ap100ul
。100ug/ml),質(zhì)粒pUC19具有Ap抗性基因,使得帶有pUC19的質(zhì)粒得以生長。 過夜培養(yǎng)后菌體量大,雜質(zhì)較多,然后用移液槍吸取過夜培養(yǎng)物2ml轉(zhuǎn)接于50mlLB液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)基中加入Ap250ul,37℃振蕩培養(yǎng)4—6h至對數(shù)生長期后期,生長速率快,代謝旺盛,酶系活躍,雜質(zhì)少,適合提取質(zhì)粒。
3、質(zhì)粒提取
。1)稱量空的50ml離心管的重量為14。331g,然后將三角瓶中的菌液倒至管中,不能倒?jié)M,液面距管口約1cm,7000rpm離心5分鐘后棄去上清液,收集菌體細(xì)胞。
。2)向離心管中懸滴加入5ml冰預(yù)冷的溶液Ⅰ打散菌體洗滌,用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻,同步驟(1)離心,棄去上清,將離心管倒置于吸水紙上,使上清液全部流盡干燥,然后稱重得14。437g,則菌體質(zhì)量為106mg。
(3)洗滌后每100mg菌體應(yīng)加入冰預(yù)冷的溶液Ⅰ1ml,106mg菌體按100mg菌體處理,加入溶液Ⅰ1ml,打散菌泥、吹吸混勻,冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使
溶液密度增加,懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部;維持滲透壓,防止細(xì)胞提前破裂,防止DNA受機械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑,可抑制DNase的活性,抑制微生物的生長。Tris—Cl溶液提供適當(dāng)?shù)膒H。
(4) 按比例加入新配制的溶液Ⅱ2ml(與溶液Ⅰ對應(yīng)),輕加輕搖,冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液Ⅱ中的NaOH使細(xì)胞膜發(fā)生了從bilayer(雙層膜)結(jié)構(gòu)向micelle(微囊)結(jié)構(gòu)的相變化導(dǎo)致細(xì)胞溶解。同時,強堿性使染色體DNA、質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)變性;SDS為下一步沉淀做鋪墊。
(5)按比例加入冰預(yù)冷的溶液Ⅲ1。5ml(與溶液Ⅰ、Ⅱ?qū)?yīng)),輕加輕搖,冰浴10min。溶液出現(xiàn)白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物、細(xì)胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH,因為長時間的堿性條件會打斷基因組DNA,只要是50-100 kb大小的片斷,就不能再被PDS共沉淀。同時變性的質(zhì)粒DNA復(fù)性。反應(yīng)形成的高鹽環(huán)境進一步加速了沉淀。
(6)12000rpm離心15min,白色沉淀聚集在離心管一側(cè),用移液槍將上清液轉(zhuǎn)移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3MNaAc混勻,加入2倍體積的冰無水乙醇,混勻,—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng),對DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在,當(dāng)加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。在pH為8左右的溶液中,DNA分子是帶負(fù)電荷的,加一定濃度的NaAc或NaCl,易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀。
(7) 以12000rpm離心15min,小心倒去上清液,得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇,輕輕地覆蓋沉淀,不打散沉淀,洗滌一次。
。8)以12000rpm離心5min,離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。去掉上清液,將離心管上沉淀部位做好標(biāo)記,將離心管倒置于吸水紙上,干燥5min。粗提取的質(zhì)粒呈淺黃色,隨著水分的減少質(zhì)粒變?yōu)闊o色。所以為了完全溶解質(zhì)粒,要在離心管上標(biāo)記質(zhì)粒所在位置。
(9)將DNA沉淀溶于1mlTE緩沖液中,移液槍吹吸助溶,然后將溶解液轉(zhuǎn)移到一個Eppendorf管中。TE是pH緩沖液,為DNA提供穩(wěn)定的生理狀態(tài),呈弱堿性,有利于保護堿基對。同時含有EDTA是二價陽離子的螯合劑,抑制DNA酶作用。
4、質(zhì)粒純化
(1)Eppendorf管中加入RNase A(純濃度>50ug/ml),37℃保溫0。5—1h
。2)將上述的溶液平均分配到2個1。5ml的微量離心管中,每管0。5ml,分別加入與溶液等體積的(500ul)Tris飽和苯酚溶液,振蕩混勻,7000rpm,離心5min,上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是經(jīng)Tris飽和后的,顯黃色。苯
酚加入后,溶液分層,苯酚向下,下層呈淺黃色,上層溶液無色,在中間產(chǎn)生大量白色沉淀,此為變性后的蛋白質(zhì)。
。3)加入等體積的(500ul)苯酚/氯仿溶液(1:1),振蕩混勻, 7000rpm,離心5min,上清液轉(zhuǎn)移到到另一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是強的蛋白變性劑,但是苯酚留在質(zhì)粒溶液中會影響DNA的酶切,它本身易被氧化,會損傷質(zhì)粒。氯仿也是蛋白變性劑,但是比酚弱,且能溶解質(zhì)粒中的脂類,溶解苯酚,去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現(xiàn)的泡沫,有利于分層更明顯。此時溶液中已看不到明顯的白色沉淀,但仍有蛋白質(zhì)的存在。
。4)加入等體積的氯仿溶液,振蕩混勻, 7000rpm,離心5min,上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中,得上清液400ul。
。5)向上清液中加入1/10體積的NaAc混勻,再加入2倍體積的冰無水乙醇,混勻,—20℃下沉降30分鐘。
。6)以12000rpm,離心15min,棄去上清液,得到DNA沉淀,為白色。
。7)向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul,不打散沉淀,洗滌。然后以12000rpm離心5min,離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。
。8)去掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,室溫干燥。用50ulTE溶解于1管中。
5、質(zhì)粒檢測
。1)稱取0。4g的瓊脂糖,置于一錐形瓶中,在三角瓶上標(biāo)好液面位置,加入40ml的1×TAE電泳緩沖液,再加入5—10ml重蒸水,以補充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化,溶液透明。冷卻至50℃左右,倒入制板槽制板。
。2)待膠凝固后,小心拔起梳子,使加樣孔端置陰極段放進電泳槽內(nèi)。在槽內(nèi)加入1×TAE 電泳緩沖液,至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質(zhì)粒樣品于小紙片上,用移液槍混勻。
。3)電泳1h,觀察溴酚蘭的帶(藍(lán)色)的移動。
(4) 把膠槽取出,小心滑出膠塊,放進EB溶液中進行染色,完全浸泡約5min。
。5)凝膠成像儀觀察。
五、【注意事項】
(1)滴加溶液II時,要逐滴加入,且要輕加輕搖溶液使之混勻,整體動作要快,因為強堿在溶液中停留時間不能過長,否則會破壞質(zhì)粒DNA。
(2)加入溶液III后,生成了大量的'絮狀沉淀,溶液III中和強堿使質(zhì)粒復(fù)性,不可劇烈震蕩, 防止染色體DNA斷裂,應(yīng)該上下顛倒離心管,使其混勻。
生物實驗報告12
一、 實驗室規(guī)則
1.實驗前應(yīng)認(rèn)真預(yù)習(xí)實驗指導(dǎo),明確實驗?zāi)康暮鸵螅瑢懗鲱A(yù)實驗報告。
2.進入實驗室必須穿白大衣。嚴(yán)格遵守實驗課紀(jì)律,不得無故遲到或早退。不得高聲說話。嚴(yán)禁拿實驗器具開玩笑。實驗室內(nèi)禁止吸煙、用餐。
3.嚴(yán)格按操作規(guī)程進行實驗。實驗過程中自己不能解決或決定的問題,切勿盲目處理,應(yīng)及時請教指導(dǎo)老師。
4.嚴(yán)格按操作規(guī)程使用儀器,凡不熟悉操作方法的儀器不得隨意動用,對貴重的精密儀器必須先熟知使用方法,才能開始使用;儀器發(fā)生故障,應(yīng)立即關(guān)閉電源并報告老師,不得擅自拆修。
5.取用試劑時必須“隨開隨蓋”,“蓋隨瓶走”,即用畢立即蓋好放回原處,切忌“張冠李戴”,避免污染。
6.愛護公物,節(jié)約水、電、試劑,遵守?fù)p壞儀器報告、登記、賠償制度。
7.注意水、電、試劑的使用安全。使用易燃易爆物品時應(yīng)遠(yuǎn)離火源。用試管加熱時,管口不準(zhǔn)對人。嚴(yán)防強酸強堿及有毒物質(zhì)吸入口內(nèi)或濺到別人身上。任何時候不得將強酸、強堿、高溫、有毒物質(zhì)拋灑在實驗臺上。
8.廢紙及其它固體廢物嚴(yán)禁倒入水槽,應(yīng)倒到垃圾桶內(nèi)。廢棄液體如為強酸強堿,必須事先用水稀釋,方可倒入水槽內(nèi),并放水沖走。
9.以實事求是的科學(xué)態(tài)度如實記錄實驗結(jié)果,仔細(xì)分析,做出客觀結(jié)論。
實驗失敗,須認(rèn)真查找原因,而不能任意涂改實驗結(jié)果。實驗完畢,認(rèn)真書寫實驗報告,按時上交。
10.實驗完畢,個人應(yīng)將試劑、儀器器材擺放整齊,用過的玻璃器皿應(yīng)刷洗干凈歸置好,方可離開實驗室。值日生則要認(rèn)真負(fù)責(zé)整個實驗室的清潔和整理,保持實驗整潔衛(wèi)生。離開實驗室前檢查電源、水源和門窗的安全等,并嚴(yán)格執(zhí)行值日生登記制度。
二、實驗報告的基本要求
實驗報告通過分析總結(jié)實驗的結(jié)果和問題,加深對有關(guān)理論和技術(shù)的理解與掌握,提高分析、綜合、概括問題的能力,同時也是學(xué)習(xí)撰寫研究論文的過程。
1.實驗報告應(yīng)該在專用的生化實驗報告本上、按上述格式要求書寫。
2.實驗報告的前三部分①實驗原理、②實驗材料(包括實驗樣品、主要試劑、主要儀器與器材)、③實驗步驟(包括實驗流程與操作步驟)要求在實驗課前預(yù)習(xí)后撰寫,作為實驗預(yù)習(xí)報告的內(nèi)容。預(yù)習(xí)時也要考慮并設(shè)計好相應(yīng)實驗記錄的表格。
3.每項內(nèi)容的基本要求
(1)實驗原理:簡明扼要地寫出實驗的原理,涉及化學(xué)反應(yīng)時用化學(xué)反應(yīng)方程式表示。
。2)實驗材料:應(yīng)包括各種來源的生物樣品及試劑和主要儀器。說明化學(xué)試劑時要避免使用未被普遍接受的商品名和俗名。試劑要標(biāo)清所用的濃度。
(3)實驗步驟:描述要簡潔,不能照抄實驗講義,可以采用工藝流程圖的方式或自行設(shè)計的表格來表示,但對實驗條件和操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)應(yīng)寫清楚,以便他人重復(fù)。
(4)實驗記錄:包括主要實驗條件、實驗中觀察到的現(xiàn)象及實驗中的原始數(shù)據(jù)。
。5)結(jié)果(定量實驗包括計算):應(yīng)把所得的實驗結(jié)果(如觀察現(xiàn)象)和數(shù)據(jù)進行整理、歸納、分析、對比,盡量用圖表的形式概括實驗的結(jié)果,如實驗組與對照組實驗結(jié)果的比較表等(有時對實驗結(jié)果還可附以必要的說明)。
。6)討論:不應(yīng)是實驗結(jié)果的重述,而是以結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯推論。如對定性實驗,在分析實驗結(jié)果的基礎(chǔ)上應(yīng)有中肯的結(jié)論。還可以包括關(guān)于實驗方法、操作技術(shù)和有關(guān)實驗的一些問題,對實驗異常結(jié)果的分析和評論,對于實驗設(shè)計的認(rèn)識、體會和建議,對實驗課的改進意見等。
(7)結(jié)論:一般實驗要有結(jié)論,結(jié)論要簡單扼要,說明本次實驗所獲得的結(jié)果。
三、實驗報告的評分標(biāo)準(zhǔn)(百分制)
1.實驗預(yù)習(xí)報告內(nèi)容(30分)
學(xué)生進入實驗室前應(yīng)預(yù)習(xí)實驗,并書寫預(yù)習(xí)報告。實驗預(yù)習(xí)報告應(yīng)包括以下三部分: ①實驗原理(10分):要求以自己的語言歸納要點;②實驗材料(5分):包括樣品、試劑及儀器。只列出主要儀器、試劑(常規(guī)材料不列);③實驗方法(15分):包括流程或路線、操作步驟,要以流程圖、表格式給出要點,簡明扼要。依據(jù)各部分內(nèi)容是否完整、清楚、簡明等,分以下三個等級給分。
優(yōu)秀:項目完整,能反映實驗者的加工、整理、提煉。
合格:較完整,有一定整理,但不夠精煉。
不合格:不完整、缺項,大段文字,完全照抄教材,記流水賬。
實驗預(yù)習(xí)報告不合格者,不允許進行實驗。該實驗應(yīng)重新預(yù)約,待實驗室安排時間后方可進行實驗。
2.實驗記錄內(nèi)容(20分)
實驗記錄是實驗教學(xué)、科學(xué)研究的重要環(huán)節(jié)之一,必須培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)。
實驗記錄的主要內(nèi)容包括以下三方面:①主要實驗條件(如材料的來源、質(zhì)量;試劑的規(guī)格、用量、濃度;實驗時間、操作要點中的技巧、失誤等,以便總結(jié)實驗時進行核對和作為查找成敗原因的參考依據(jù));②實驗中觀察到的現(xiàn)象(如加入試劑后溶液顏色的變化);③原始實驗數(shù)據(jù):設(shè)計實驗數(shù)據(jù)表格(注意三線表格式),準(zhǔn)確記錄實驗中測得的原始數(shù)據(jù)。記錄測量值時,要根據(jù)儀器的精確度準(zhǔn)確記錄有效數(shù)字(如吸光值為0.050,不應(yīng)寫成0.05),注意有效數(shù)字的位數(shù)。
實驗記錄應(yīng)在實驗過程中書寫;應(yīng)該用鋼筆或者圓珠筆記錄,不能用鉛筆。記錄不可擦抹和涂改,寫錯時可以準(zhǔn)確劃去重記。記錄數(shù)據(jù)時請教師審核并簽名。
實驗記錄分以下三個等級給分。
優(yōu)秀:如實詳細(xì)地記錄了實驗條件、實驗中觀察到的現(xiàn)象、結(jié)果及實驗中的原始數(shù)據(jù)(如三次測定的吸光度值)等;實驗記錄用鋼筆或者圓珠筆記錄,沒有抹擦和涂改跡象。書寫準(zhǔn)確,表格規(guī)范(三線表)。有教師的簽字審核。
合格:記錄了主要實驗條件,但不詳細(xì)、凌亂;實驗中觀察到的現(xiàn)象不細(xì)致;原始數(shù)據(jù)無涂改跡象,但不規(guī)范。有教師的簽字審核。
不合格:記錄不完整,有遺漏;原始數(shù)據(jù)有抹擦和涂改跡象、捏造數(shù)據(jù)(以0分計);圖、表格形式錯誤;用鉛筆記錄原始數(shù)據(jù);無教師的簽字審核。 若記錄的結(jié)果有懷疑、遺漏、丟失,必須重做實驗,培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)。
3.結(jié)果與討論(45分)
。1)數(shù)據(jù)處理(5分)
對實驗中所測得的一系列數(shù)值,要選擇合適的處理方法進行整理和分析。數(shù)據(jù)處理時,要根據(jù)計算公式正確書寫中間計算過程或推導(dǎo)過程及結(jié)果,得出最終實驗結(jié)果。要注意有效數(shù)字的位數(shù)、單位(國際單位制)。經(jīng)過統(tǒng)計處理的數(shù)據(jù)要以X〒SD表示?煞殖梢韵氯齻等級給分。
優(yōu)秀:處理方法合理,中間過程清楚,數(shù)據(jù)格式單位規(guī)范。
合格:處理方法較合理,有中間計算過程;數(shù)據(jù)格式單位較規(guī)范。
不合格:處理方法不當(dāng);無中間過程;有效數(shù)字的位數(shù)、單位不規(guī)范。
。2)結(jié)果(20分)
實驗結(jié)果部分應(yīng)把所觀察到的現(xiàn)象和處理的最終數(shù)據(jù)進行歸納、分析、比對,以列表法或作圖法來表示。同時對結(jié)果還可附以必要的說明。
要注意圖表的規(guī)范:表格要有編號、標(biāo)題;表格中數(shù)據(jù)要有單位(通常列在每一列頂端的第一行或每一行左端的第一列)。圖也要有編號、標(biāo)題,標(biāo)注在圖的下方;直角坐標(biāo)圖的縱軸和橫軸要標(biāo)出方向、名稱、單位和長度單位;電泳圖譜和層析圖譜等要標(biāo)明正、負(fù)極方向及分離出的區(qū)帶、色帶或色斑的組分或成分。電泳結(jié)果還要標(biāo)記泳道,并在圖題下給出泳道的注釋;要標(biāo)出分子量標(biāo)準(zhǔn)的各條帶的大小。并且注意需要結(jié)合圖表對結(jié)果進行較詳細(xì)的解釋說明。
可分成以下三個等級給分。
優(yōu)秀:實驗結(jié)果有歸納、 解釋說明,結(jié)果準(zhǔn)確,格式規(guī)范。
合格:堆砌實驗現(xiàn)象、數(shù)據(jù),解釋說明少。
不合格:最終實驗結(jié)果錯誤且無解釋說明,圖表、數(shù)字不規(guī)范。
。3)討論(20分)
討論應(yīng)圍繞實驗結(jié)果進行,不是實驗結(jié)果的重述,而是以實驗結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯推論,基本內(nèi)容包括:①用已有的專業(yè)知識理論對實驗結(jié)果進行討論,從理論上對實驗結(jié)果的各種資料、數(shù)據(jù)、現(xiàn)象等進行綜合分析、解釋,說明實驗結(jié)果,重點闡述實驗中出現(xiàn)的一般規(guī)律與特殊性規(guī)律之間的關(guān)系。
生物實驗報告13
霉菌的培養(yǎng)與形態(tài)學(xué)觀察:實驗一真菌培養(yǎng)基的配制與滅菌
實驗?zāi)康模?/strong>
。1)了解培養(yǎng)基的配置原理和方法,掌握分離培養(yǎng)微生物的有關(guān)準(zhǔn)備工作。
(2)掌握高壓滅菌方法及原理
實驗原理:
。1)培養(yǎng)基的制備原理:
培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。
從營養(yǎng)角度分析:
營養(yǎng):碳源、氮源、能源、生長素、水分和無機鹽等;?適宜的酸堿度(pH值)和一定緩沖能力;?一定的氧化還原電位;?合適的滲透壓。
瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì),是應(yīng)用最廣的凝固劑。加瓊脂制成的培養(yǎng)基在98~100℃下融化,于45℃以下凝固,不容易被微生物污染。但多次反復(fù)融化,其凝固性降低。
。2)濕熱滅菌原理-高壓蒸汽滅菌
在密閉的蒸鍋內(nèi),其中的蒸汽不能外溢,壓力不斷上升,使水的沸點不斷提高,從而鍋內(nèi)溫
度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下,鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃。在此蒸汽溫度下,可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。
實驗材料與方法
配制培養(yǎng)基所需器材
實驗設(shè)備:高壓蒸汽滅菌器。
實驗器材:500ml三角燒瓶、藍(lán)蓋瓶、5ml刻度吸管、培養(yǎng)基、天平、砝碼、
稱量紙、藥勺、500ml、100ml量筒、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、鐵絲筐、平皿、剪刀等。
培養(yǎng)基等集中放講臺前高壓桶內(nèi),送到洗刷室統(tǒng)一高壓滅菌條件及注意事項
高壓滅菌條件:121.3℃,15min。含糖培養(yǎng)基113℃,15min。
倒平板電爐加熱滅菌好的培養(yǎng)基打開平皿包裝倒平板(10塊)注意事項:空氣環(huán)境無菌(應(yīng)在酒精燈火焰周圍無菌區(qū))。
a.在酒精燈火焰處,傾斜打開瓶口。
b.瓶口要過火焰。
c.左手掀開平皿小口。
d.傾注滿皿底再多一點,約10ml(7cm直徑平皿)。
e.推放一邊要輕緩,不能晃起瓊脂掛壁,易在培養(yǎng)過程中污染雜菌。
f.完全凝固再翻轉(zhuǎn)平板放塑料筐內(nèi),4℃?zhèn)溆谩?/p>
分析與討論
。1)如何證明培養(yǎng)基滅菌是否徹底?
把滅菌后的培養(yǎng)基按滅菌鍋內(nèi)的不同位置,每處抽取數(shù)管(瓶),標(biāo)上記號,置25℃~30℃培養(yǎng)一周左右進行檢查。如果培養(yǎng)基沒有什么變化,說明滅菌效果良好;如果某一位置的培養(yǎng)基出現(xiàn)了雜菌菌落,可能是擺放的太緊,導(dǎo)致蒸汽不暢,或鍋的結(jié)構(gòu)不合理等原因所致,應(yīng)根據(jù)上述情況進行改進;如果大部分或全部菌種瓶都出現(xiàn)雜菌,說明滅菌溫度或滅菌時間不夠,應(yīng)提高壓力或延長滅菌時間。經(jīng)過幾次檢驗都證明能徹底滅菌后,以后按同樣條件滅菌的則不必進行檢查。
經(jīng)過幾次檢驗都證明能徹底滅菌后,以后按同樣條件滅菌的則不必進行檢查。
。2)為什么說消毒與滅菌是微生物學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)必不可少的基本知識?由于病原生物廣泛存在于自然界,可通過不同途徑和媒介進入人體,引起感染或造成疾病流行。因此,殺滅或清除存在于體外傳播媒介上的病原生物,對于切斷傳播途徑、預(yù)防和控制其感染具有重要意義。自古以來,人們就利用煮沸、火燒、日曬等方法殺滅或去除微生物,達(dá)到預(yù)防疾病的目的。實際上,除了在臨床醫(yī)療實踐中需要防止微生物的污染或感染外,在微生物學(xué)實驗室、食物保存、飲水凈化、藥品與生物制品生產(chǎn)等過程中都需要避免微生物的污染。
實驗二霉菌的接種與培養(yǎng)
實驗?zāi)康呐c要求:掌握霉菌與酵母菌的接種與培養(yǎng)方法。
實驗原理:
接種是微生物實驗及科學(xué)研究中一項基本操作技術(shù)。根據(jù)實驗?zāi)康暮鸵螅?/p>
選擇合適的接種工具與接種方法,接種工具有接種環(huán)、接種針、接種鏟、接種鉤、吸管、滴管、棉簽等。常用接種方法有:斜面接種,液體接種,穿刺接種,平板接種和固體接種。接種的關(guān)鍵是無菌操作。
無菌操作的原則:在酒精燈火焰旁進行,所有器皿均須嚴(yán)格消毒,培養(yǎng)基應(yīng)事先做無菌試驗,
接種工具使用前后須經(jīng)火焰燒灼滅菌,棉塞不能亂放,始終夾在手指中。在培養(yǎng)四大類微生物時應(yīng)注意選擇適宜的培養(yǎng)條件。多數(shù)細(xì)菌為專性需氧菌與兼性需氧菌,少數(shù)為厭氧菌。多數(shù)食品腐敗菌和工業(yè)用菌種,以及人和動物病原菌的最適生長溫度為37℃,并且在近中性(PH6.5~7.5)條件下生長良好。多數(shù)放線菌為好氧菌,少數(shù)為厭氧菌,最適生長溫度為28~30℃,多數(shù)適宜在偏堿性環(huán)境中生長(PH7.5~8.5)。
實驗材料與方法
。1)實驗材料:實驗設(shè)備:溫箱。
實驗器材:毛霉、曲霉、青霉、根霉、啤酒酵母、白假絲酵母、新生隱球酵母菌、細(xì)黃鏈霉菌、PDA平板、高鹽察氏平板、高氏合成I號平板、塑料筐、20%甘油水溶液、鑷子、接種鏟、無菌蓋玻片、無菌濾紙、無菌載玻片、石棉網(wǎng)、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、鐵絲筐等。
。2)實驗方法:平板接種:毛霉→PDA平板(點植法)
啤酒酵母→PDA平板(五區(qū)分離劃線法)青霉、曲霉→PDA平板(連續(xù)劃線法)
小室載玻片培養(yǎng)法:
1、取滅菌后小室平皿。
2、取無菌PDA瓊脂薄層平板,用鑷子夾住蓋玻片切割成0.5~1.0cm2的瓊脂塊,并將其移至培養(yǎng)小室中的載玻片上,制作過程注意無菌。
3、用接種環(huán)取少量霉菌的孢子接種于培養(yǎng)基四周,用無菌鑷子
將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上,并(轉(zhuǎn)載于:l滅菌的20%甘油(用于保持濕度),蓋上皿蓋,標(biāo)記,置28~30℃培養(yǎng)3~5d
糧食產(chǎn)品的平板接種:
1.取糧食樣品20g,放入無菌燒杯,加無菌水洗滌,
反復(fù)10次,棄去水后,將糧粒倒于平皿內(nèi)備用2.鑷子取糧食種入PDA瓊脂內(nèi),每皿可接種5-10粒。
放線菌的接種:取細(xì)黃鏈霉菌劃線法接種,在接種的劃線處,無
菌操作斜插入蓋玻片數(shù)張。
注意事項:
1.空氣環(huán)境無菌(應(yīng)在酒精燈火焰周圍無菌區(qū))
2.在酒精燈火焰處,傾斜打開瓶口。
3.接種環(huán)使用前,直接在酒精燈上燒灼滅菌,把環(huán)和金屬絲燒紅即可。
4.接種環(huán)使用后,先在火焰周圍把環(huán)上標(biāo)本烤干,再燒灼滅菌,以免標(biāo)本汽化,爆烈四濺,污染環(huán)境。5.金屬桿快速通過火焰2-3次,殺滅表面微生物
分析與討論
1、糧食中產(chǎn)毒真菌的種類及產(chǎn)生毒素?
青霉、毛霉、曲霉、根霉、酵母、白念、細(xì)黃鏈霉菌(放線菌)青霉素、絲生毛霉素、黃曲霉素、根霉素、白念菌素。細(xì)黃鏈菌素
2、常用霉菌培養(yǎng)基有哪些?
馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基
豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)瓊脂培養(yǎng)基察氏培養(yǎng)基
3、霉菌的接種方法有何不同?為什么?
(1)連續(xù)劃線法(青霉、曲霉)
青霉與曲霉為局限性生長的霉菌。應(yīng)采用連續(xù)劃線接種法接種。(2)點植法(根霉、毛霉)
根霉與毛霉生長區(qū)域比較大,應(yīng)采用點植法。(3)小室載玻片培養(yǎng)法(青霉、毛霉、根霉、曲霉)
實驗三霉菌的制片與形態(tài)觀察
實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法;
了解四類常見霉菌的基本形態(tài)特征。了解放線菌的基本形態(tài)特征。
實驗原理:霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多(約為3-10μm),常是細(xì)
菌菌體寬度的幾倍至幾十倍,因此,用低倍顯微鏡即可觀察。霉菌菌絲較粗大,細(xì)胞易收縮變形,且孢子容易飛散,所以制標(biāo)本時常用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液,用此染液做霉菌制片的特點是細(xì)胞不變形,具有殺菌、防腐作用,不易干燥,能保持較長時間,能防止孢子四處飛散,棉蘭具有一定的染色作用,染液的藍(lán)色能增大反差。
實驗材料:
(一)菌種:在馬鈴薯瓊脂平板上培養(yǎng)3—4天的青霉(Penicilliumsp.)、曲霉(Aspergillussp.)、毛霉(Mucorsp.)、根霉;
。ǘ┢鞑募坝镁撸鸿囎印⑤d玻片、蓋玻片、顯微鏡。
實驗方法:
(一)直接制片觀察
于潔凈載玻片上,用鑷子取霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲,然后小心地蓋上蓋玻
片。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察,必要時再換高倍鏡(二)小室培養(yǎng)觀察
將載玻片直接放低倍鏡下觀察,再換高倍鏡觀察。
觀察原則:
毛霉:用低倍鏡觀察孢子囊梗、囊軸等。用高倍鏡觀察孢子囊孢子的形
狀、大小。
根霉:菌絲、孢子同毛霉,注意觀察有無假根。
曲霉:在高倍鏡下觀察菌絲有無隔膜,分生孢子著生位置,辨認(rèn)分生孢
子梗、頂囊、小梗和分生孢子。
青霉:在高倍鏡下觀察菌絲有無隔膜,分生孢子梗、副枝、小梗和分生
孢子的形狀等。實驗結(jié)果:
分析與討論:
青霉和曲霉的形態(tài)有哪些異同?
青霉常分布在霉腐變質(zhì)的水果、蔬菜、糧食和皮革等物體上,菌體直立菌絲的頂端長有掃帚狀的結(jié)構(gòu),結(jié)構(gòu)的每一個分枝上,生有成串的孢子,成熟的孢子呈青綠色,進行孢子生殖。
曲霉廣泛分布在谷物、空氣和土壤中,曲霉直立菌絲的頂端膨大成球狀,球狀結(jié)構(gòu)的表面放射狀地生有成串的孢子,孢子隨曲霉種類的不同而呈黃色、橙色或黑色。
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生物實驗報告14
一、實驗名稱:
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞
二、實驗材料:
顯微鏡、洋蔥表皮細(xì)胞切片,及其他細(xì)胞裝片。
三、實驗步驟:
1、右手握住鏡臂,左手托住鏡座,把顯微鏡向著光放在實驗臺上。
2、對光:轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器,使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔。
3、調(diào)節(jié)載物臺下的反光鏡,從目鏡往下看,能看見亮的光圈。
4、觀察:調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋,把所要觀察的洋蔥表皮切片放在載物臺上,用壓片夾夾住,標(biāo)本要正對通光孔的中央。
5、左眼向目鏡內(nèi)看,同時轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋等,直到看清切片上的細(xì)胞為止,最后整理器材。
四、使用注意事項:
1、取送顯微鏡時,應(yīng)右手握住鏡臂,左手托住鏡座,輕拿輕放。
2、鏡檢時,坐姿端正,一般用左眼觀察物象,用右眼看著實驗報告紙畫圖。兩眼須同時睜開。
3、切忌一面從目鏡進行觀察,一面使鏡筒下降,這樣容易使物鏡與玻片標(biāo)本碰撞而損壞。
4、在高倍鏡下調(diào)節(jié)焦距時,切勿使用粗調(diào)節(jié)器,以免壓壞標(biāo)本,損壞物鏡。
5、顯微鏡使用完畢必須先上升鏡筒,移開鏡頭后再取出玻片標(biāo)本,以免取玻片時擦損鏡頭的鏡面。
五、實驗原理:
利用教學(xué)顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
六、創(chuàng)新點:
在實驗過程中為學(xué)生提供多種細(xì)胞裝片,以供學(xué)生操作、觀察,增加了學(xué)生動手實驗的時間,使學(xué)生在實驗中經(jīng)歷調(diào)節(jié)顯微鏡的焦距的過程,從而熟練掌握教學(xué)教學(xué)顯微鏡的使用方法。
生物實驗報告15
實驗名稱:
觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
實驗?zāi)康模?/strong>
1、學(xué)習(xí)制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本。
2、學(xué)會使用顯微鏡觀察洋蔥表皮,用圖畫記錄觀察到的洋蔥表皮細(xì)胞。
3、對比用肉眼、放大鏡、顯微鏡看到的洋蔥表皮各有什么不同。
實驗重點:
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
實驗難點:
正確使用顯微鏡。
實驗準(zhǔn)備:
分組實驗器材:顯微鏡、洋蔥、小刀、清水、滴管、吸水紙、載玻片、蓋玻片、鑷子、放大鏡等。 實驗過程:
一、導(dǎo)入課題
出示洋蔥。問:如果從它的內(nèi)表皮上揭下一塊,用顯微鏡來觀察能看到些什么呢?(板書課題)
二、制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本
1、師講解并演示制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本的方法與步驟。
。1)在一個干凈的玻璃載片中間滴一滴清水;
。2)用小刀在洋蔥鱗葉片內(nèi)壁劃一個“井”字,用鑷子取下“井”中洋蔥內(nèi)表皮放到載玻片的水滴中央,注意標(biāo)本要平展開,不能折疊;
。3)用蓋玻片傾斜著蓋到標(biāo)本上面,放蓋玻片時,先放一端,再慢慢放下另一端,注意不要有氣泡。如水不足,可沿蓋玻片邊緣滴加;若水分過多,可用吸水紙吸掉;
(4)從蓋玻片的一邊滴一滴稀釋的碘酒,并把玻片微微傾斜,再在蓋玻片的另一邊用吸水紙吸掉多余的水;
。5)洋蔥表皮玻片標(biāo)本做成可進行觀察。
2、學(xué)生以組為單位自制玻片標(biāo)本(最好制三份裝片,便于下面的對比觀察),教師巡視指導(dǎo)(教育學(xué)生注意安全)。
三、觀察洋蔥表皮細(xì)胞
1、先用肉眼觀察洋蔥表皮將看到的內(nèi)容畫在科學(xué)記錄本上。
2、再用放大鏡觀察洋蔥表皮將看到的內(nèi)容畫到科學(xué)記錄本上。
3、學(xué)生交流用肉眼和放大鏡分別觀察到什么?它們有何不同?
4、利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
。1)、出示顯微鏡,引導(dǎo)學(xué)生認(rèn)識顯微鏡,簡介各部分的名稱、功能及使用方法,學(xué)生每5人一組操作熟悉顯微鏡。
。2)、各組利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。(師操作演示:安放――對光――上片――調(diào)焦――觀察。生一步步跟著操作。)
(3)、學(xué)生觀察、記錄、描畫洋蔥表皮細(xì)胞。教師巡視指導(dǎo),各組的實驗組長監(jiān)督組員操作是否規(guī)范,要求每個人都要操作、都要觀察,并將觀察結(jié)果進行交流。組長將大家在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)畫到科學(xué)記錄本上。
5、全班交流在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)。
。1)各組推薦發(fā)言代表談自己的發(fā)現(xiàn)。
。2)各組將所畫的觀察結(jié)果向全班展示。
(3)交流討論評價。
6、師小結(jié):我們發(fā)現(xiàn)放大鏡比肉眼、顯微鏡比放大鏡看到的細(xì)節(jié)更多,更清楚。我們發(fā)現(xiàn)洋蔥表皮是由一個個比較規(guī)則的多邊形組成的,而且大多呈長方形,外為細(xì)胞壁,內(nèi)為無色細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。洋蔥表皮上的一個個小房間似的結(jié)構(gòu),就是洋蔥的細(xì)胞。(師一邊描述一邊畫洋蔥細(xì)胞簡圖)
四、實驗結(jié)束。
回收實驗器材,整理實驗桌。
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