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生化實(shí)驗(yàn)試題參考
篇一：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)考試試題(完整版)
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)
二、填空題：
1. 測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法有(雙縮脲法)， (紫外吸收法)，( Folin-酚試劑法（或Lowry法） )和 （考馬斯亮
藍(lán)G-250染色法）。
2. CAT能把H2O2分解為H2O和O2，其活性大小以（以一定時(shí)間內(nèi)分解的H2O2量）來(lái)表示，當(dāng)CAT
與H2O2反應(yīng)結(jié)束，再用 （碘量法） 測(cè)定未分解的H2O2。
3. 聚丙烯酰胺凝膠電泳是以 （聚丙烯酰胺凝膠） 作為載體的一種區(qū)帶電泳，這種凝膠是由（Acr） 和交聯(lián)劑（Bis） 在催化劑作用下聚合而成�；瘜W(xué)聚合法一般用來(lái)制備（分離）膠，其自由基的引發(fā)劑是（Ap），催化劑是（TEMED） ；光聚合法適于制備大孔徑的（濃縮）膠，催化劑是（核黃素） 。
4.層析技術(shù)按分離過(guò)程所主要依據(jù)的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分類，可分成以下幾種：（吸附層析），（分配層析 ），（離子交換層析），（凝膠層析 ）和 （親和層析） 。
5. 使用離心機(jī)離心樣品前，必須使離心管（等重）且對(duì)稱放入離心機(jī)。
6. 米氏常數(shù)可近似表示酶和底物親合力，Km愈小，表示E對(duì)S的親合力愈（大） ，Km愈大，表示E對(duì)S
的親合力愈（�。� 。
7. 分光光度計(jì)在使用之前必須預(yù)熱，注意預(yù)熱及樣品槽空時(shí)必須__（打開）____（打開、合上）樣品池翻蓋。
8. CAT是植物體內(nèi)重要的酶促防御系統(tǒng)之一，其活性高低與植物的（抗逆性）密切相關(guān)。
9. 紙層析實(shí)驗(yàn)中，____________形成固定相，____________流動(dòng)相。
10. 聚丙烯酰胺凝膠是是由 和交聯(lián)劑 在催化劑作用下聚合而成的，在具有自
由基團(tuán)體系時(shí)，兩者就聚合。引發(fā)產(chǎn)生自由基的方法有兩種：（化學(xué)法）和（光聚合法）。
11. 層析技術(shù)按按固定相的使用形式進(jìn)行分類，可分成以下幾種：（柱層析），（紙層析），（薄層層析）和（薄
膜層析）。
參考答案：
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)
一、名詞解釋：
1、電泳：指帶電粒子在電場(chǎng)中向與其自身所帶電荷相反的電極方向移動(dòng)的現(xiàn)象。
2、同工酶：指催化同一種化學(xué)反應(yīng)，但其酶蛋白本身的分子結(jié)構(gòu)組成卻有所不同的一組酶。
3、分配層析法：用物質(zhì)在兩種或兩種以上不同的混合溶劑中的分配系數(shù)不同，而達(dá)到分離目的的一種實(shí)驗(yàn)方法。
4、酶活性：酶催化化學(xué)反應(yīng)的能力，往往以酶促反應(yīng)的初速度表示。
5、分光光度法：基于溶液對(duì)光吸收的大小來(lái)確定被測(cè)組份的含量的分析方法稱為分光光度法或吸光光度法。
6、層析技術(shù)：是利用被分離的混合物中各組分的理化性質(zhì)（分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、
分子親和力、分配系數(shù)等）的不同，使各組分以不同程度在流動(dòng)相和固定相中進(jìn)行分配，最終達(dá)到分離
目的。
7、比活力：即每毫克酶蛋白所含酶的活力單位數(shù)。比活力高，表示酶純度高。
二、填空題：
9. 丙烯酰胺單體（Acr），N，N’-甲叉雙丙烯酰胺（Bis）
1、簡(jiǎn)述4種測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法及其原理。
答：(1)考馬斯亮藍(lán)G-250染色法：
考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合蛋白質(zhì)后，形成藍(lán)色CBG-蛋白質(zhì)結(jié)合物，最大光吸收在595nm。在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)（10-1000ug/ml），CBG-蛋白質(zhì)結(jié)合物的O.D595nm值與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用分光光度法進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。
�。�2）雙縮脲法：
蛋白質(zhì)含有兩個(gè)以上的肽鍵（-CO-NH-）因此，有雙縮脲反應(yīng)，在堿性溶液中蛋白質(zhì)與Cu2+形成紫色絡(luò)合物，其顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比，而與蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量及aa成分無(wú)關(guān)，故可以用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量；
�。�3）Folin-酚試劑法（Lowry法）：
是雙縮脲法的發(fā)展，第一步涉及到堿性溶液中銅蛋白質(zhì)復(fù)合物的形成，然后這個(gè)復(fù)合物還原磷鉬酸－磷鎢酸試劑，產(chǎn)生深藍(lán)色（鉬藍(lán)和鎢藍(lán)混合物）比雙縮脲法靈敏，但費(fèi)時(shí)；
�。�4）紫外吸收法：
蛋白質(zhì)中一些氨基酸殘基中的苯環(huán)含有共軛雙鍵，所以蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)，最大吸收峰在280nm處，在一定范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，可用作定量測(cè)定，簡(jiǎn)單、靈敏、快速、不耗樣品，低濃度的鹽類不干擾。
�。�5）微量凱式定氮法：
根據(jù)蛋白質(zhì)的平均含氮量為16%，因此，測(cè)得1g蛋白氮，相當(dāng)于6.25g蛋白質(zhì)。
2、簡(jiǎn)述不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳中的三個(gè)不連續(xù)及三種物理效應(yīng)。
答：三個(gè)不連續(xù)：（1）凝膠由上下兩層凝膠組成，兩層凝膠的孔徑不同；
（2）緩沖液離子組成及各層凝膠的pH不同；
�。�3）在電場(chǎng)中形成不連續(xù)的電位梯度。
三種物理效應(yīng)：（1）電荷效應(yīng)：酶蛋白按其所帶電荷的種類及數(shù)量，在電場(chǎng)作用下向一定的電極以一定的速
度泳動(dòng)。
�。�2）分子篩效應(yīng)：分子量、形狀不同的分子在經(jīng)過(guò)凝膠孔徑過(guò)程中，受到的阻力不同，因此
移動(dòng)速率不等。
�。�3）濃縮效應(yīng)：使待分離樣品中的各組分在濃縮膠中被壓縮成層，使原來(lái)很稀的樣品得到高
度的濃縮。
3、試分析影響電泳的主要因素有哪些？
答：（1）帶電顆粒的大小和形狀：顆粒越大，電泳速度越慢，反之越快；
�。�2）顆粒的電荷數(shù)：電荷越少，電泳速度越慢，反之越快；
�。�3）電場(chǎng)強(qiáng)度：電場(chǎng)強(qiáng)度越小，電泳速度越慢，反之越快；
（4）溶液的pH值：影響被分離物質(zhì)的解離度，離等電點(diǎn)越近，電泳速度越慢，反之越快；
�。�5）溶液的粘度：粘度越大，電泳速度越慢，反之越快；
�。�6）離子強(qiáng)度：離子強(qiáng)度越大，電泳速度越慢，反之越快；
�。�7）電滲現(xiàn)象：電場(chǎng)中，液體相對(duì)于固體支持物的相對(duì)移動(dòng)；
�。�8）支持物篩孔大小，孔徑越小，電泳速度越慢，反之越快。
篇二：生化實(shí)驗(yàn)試題
改良Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，醋纖膜電泳及凝膠層析分離蛋白質(zhì)和SDS-PAGE三個(gè)實(shí)驗(yàn)屬于蛋白質(zhì)的內(nèi)容，琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制和檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性屬于酶的部分，觀察激素對(duì)家兔血糖濃度的影響涉及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和糖代謝章節(jié)的知識(shí)，質(zhì)粒抽提、核酸電泳及PCR屬于分子生物學(xué)的范疇。
一、選擇題
1．本學(xué)期所做的聚丙烯酰胺凝膠電泳實(shí)驗(yàn)主要用來(lái)分離（ ）
A．核酸B．甘油三酯 C．糖 D．蛋白質(zhì)
2．有關(guān)琥珀酸脫氫酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制實(shí)驗(yàn)的論述，錯(cuò)誤的是（ ）
A．抑制劑結(jié)構(gòu)與底物相似 B．抑制劑與酶的活性中心相結(jié)合
C．抑制劑與酶的結(jié)合是可逆的 D．抑制程度只與抑制劑的濃度有關(guān)
3．某學(xué)生用100ul可調(diào)微量移液器吸取68ul溶液，應(yīng)該將此微量移液器刻度調(diào)為（
A. 068.0 B. 032.0 C. 680.0 D. 006.8
4．用Sephadex G-50分離血紅蛋白和DNP-胰糜蛋白酶的層析方法稱( )
A．離子交換層析 B．凝膠層析
C．親和層析D．高效液相層析
5．在瓊脂糖凝膠電泳中，使核酸在紫外透射儀下顯色的是（ ）
A．氨基黑B．溴酚藍(lán) C．溴化乙錠 D．考馬斯亮藍(lán)
6．醋酸纖維素薄膜分離血清蛋白質(zhì)時(shí)，各血清蛋白的泳動(dòng)速率從小到大依次是（
A．α 1，α 2，β，albumin，γ globin B．a(chǎn)lbumin，α 1，α 2，β，γ globin
C．γ globin ，β，α 2，α 1，albumin D．γ globin，β，α 1，α 2，albumin
7．有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)曲線法的描述，錯(cuò)誤的是 （ ）
A．需要配制較多的標(biāo)準(zhǔn)管
B．待測(cè)管吸光度范圍0.05-1.0 為宜
））
C．標(biāo)準(zhǔn)管與待測(cè)管的測(cè)定應(yīng)在相同條件
D．所作標(biāo)準(zhǔn)曲線可供長(zhǎng)期使用
8．一個(gè)基本的PCR反應(yīng)體系應(yīng)該包括（）
A．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Mg2+，primase，dNTPS，水
B．模板，Taq酶，PCR Buffer，Ca2+，primers，dNTPS，去離子水
C．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Ca2+，primase，dNTPS，去離子水
D．模板，Taq酶，PCR Buffer，Mg2+，primers，dNTPS，去離子水
9．對(duì)蛋白質(zhì)定量的方法不包括（ ）
A．凱氏定氮法B．改良Lowry氏法
C．抽提法 D．紫外吸收
10．用分光光度法進(jìn)行定量分析時(shí)，基本計(jì)算公式是（ ）
A．待測(cè)液濃度=（標(biāo)準(zhǔn)液吸光度/待測(cè)液吸光度）×標(biāo)準(zhǔn)液濃度
B．待測(cè)液濃度=（待測(cè)液吸光度/標(biāo)準(zhǔn)液吸光度）×標(biāo)準(zhǔn)液濃度
二、填空題
1．制備聚丙烯酰胺凝膠時(shí)催化劑是。
2．PCR可在體外對(duì)目的基因進(jìn)行高效、快速、特異的擴(kuò)增，它的每個(gè)循環(huán)包括三個(gè)步驟，分別是變性___、___退火____、__延伸___。
3．琥珀酸脫氫酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制過(guò)程中，加入液體石蠟的作用是實(shí)驗(yàn)中使用的抑制劑是丙二酸 。
4．ALT或GPT縮寫代表，催化的反應(yīng)是 。血清中ALT（GPT）活性單位的定義是：每毫升血清在pH7.4，37℃保溫條件下與底物作用30min后，每生成_2.5_μg的丙酮酸為1個(gè)谷-丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位。
5． 分光光度計(jì)使用完畢時(shí)，為了延長(zhǎng)儀器的使用壽命，滑桿應(yīng)該放在光源對(duì)準(zhǔn)_1檔和2檔交界處______休息態(tài)__的位置。
6．PCR總反應(yīng)體系的體積是50μl，其中10×buffer加量應(yīng)為_5__μl。
7．酵母核酸定量中，總磷管需要進(jìn)行反應(yīng)，將有機(jī)磷轉(zhuǎn)變?yōu)樾枰玫闹匾噭┦?，試劑酒精燈加熱反應(yīng)過(guò)程經(jīng)歷顏色變化為 。
8．用離心機(jī)離心前，必須將裝有樣品的離心管_配平_______，并_____對(duì)稱______放置于離
心機(jī)的離心平臺(tái)上，然后蓋好上蓋，才能開啟電源。
9．激素對(duì)家兔血糖濃度的影響實(shí)驗(yàn)中，升高血糖的激素是 腎上腺素，降低血糖的激素是 胰島素 。
三、判斷題
1. 蛋白質(zhì)在小于等電點(diǎn)的pH溶液中，帶負(fù)電，電泳時(shí)向正極移動(dòng)。（ F ）
2. Lambert-Beer定律公式為A=KcL，其中K為消光系數(shù)，表示物質(zhì)對(duì)光線吸收的能力。（T）
3. 酵母核酸提取實(shí)驗(yàn)中，甲苯的作用是使蛋白質(zhì)變性。（）
4. 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）必需明確待擴(kuò)增基因片段的全部序列。（ ）
5. 瓊脂糖電泳分離核酸時(shí)（pH7.4），核酸樣品應(yīng)點(diǎn)在負(fù)極端。（ T）
6. 血糖測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，兔血經(jīng)加抗凝劑離心后所得到的上清液是血清。（ F ）
四、簡(jiǎn)答題
1．簡(jiǎn)要敘述分光光度計(jì)使用方法。
開機(jī)，調(diào)至要使用的波長(zhǎng)，預(yù)熱20min
將待比溶液倒至比色杯中，高度為2/3-4/5，手拿毛面，朝向自己，放入樣品室
調(diào)至T檔，拉桿拉至0檔（空白管），調(diào)節(jié)T=100%
拉桿拉至1檔，調(diào)節(jié)T=0
調(diào)至A檔，拉桿拉至2,3。。。檔，讀取標(biāo)準(zhǔn)液、待測(cè)液的吸光度
取出后關(guān)機(jī)
2. 簡(jiǎn)述改良Mohum法測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶GPT活性實(shí)驗(yàn)中對(duì)照管的作用？
五、實(shí)驗(yàn)計(jì)算題
1. 采用鄰甲苯胺法測(cè)定血糖濃度。
葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（0.4 mg/ml）取0.5ml，待測(cè)血漿取0.1ml。
鄰甲苯胺顯色（反應(yīng)總體積均為7ml）后，620nm波長(zhǎng)比色，以空白管調(diào)零后讀得：A標(biāo) = 0.400；A測(cè) = 0.220
請(qǐng)按照上述條件采用標(biāo)準(zhǔn)管法計(jì)算待測(cè)血漿中血糖的濃度（以mg/100ml為單位）。 C=(0.220/0.1)/(0.400/0.5)*0.4*100=110
篇三：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)理論考試題答案
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)理論考試題答案
1. 醋酸纖維薄膜電泳時(shí)點(diǎn)樣端應(yīng)靠近電極的哪一端，為什么？
答；電泳時(shí)點(diǎn)樣端應(yīng)靠近負(fù)極，因?yàn)檠逯懈鞣N蛋白質(zhì)在PH為8.6的環(huán)境中均帶負(fù)電，根據(jù)同性相吸，異性相斥原理，點(diǎn)樣端在負(fù)極時(shí)蛋白質(zhì)向正極泳動(dòng)從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)分離。
2. 用分光光度計(jì)測(cè)定物質(zhì)含量時(shí)，設(shè)置空白對(duì)照管的作用,為什么？
答；空白對(duì)照是為了排除溶劑對(duì)吸光度的影響。溶液的吸光度表示物質(zhì)對(duì)光的吸收程度，但是作為溶劑也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必須以相同的溶劑設(shè)置對(duì)照，排除溶劑對(duì)吸光度的影響。
3. 簡(jiǎn)述血清蛋白的醋酸纖維薄膜的電泳原理？
答；血清蛋白中各種蛋白質(zhì)離子在電場(chǎng)力的作用下向著與自身電荷相反的方向涌動(dòng)，而各種蛋白質(zhì)等電點(diǎn)不同，且在PH為8.6時(shí)所帶電荷不同，分子大小不等，形狀各有差異，所以在同一電泳下永動(dòng)速度不同從而實(shí)現(xiàn)分離。
4. 何謂Rf值？影響Rf值的因素？
答;Rf是原點(diǎn)到層析中心的距離與原點(diǎn)到溶劑前沿的距離之比。Rf的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，性質(zhì)，溶劑系統(tǒng)，層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度有關(guān)，對(duì)同一種物質(zhì)來(lái)講Rf是一個(gè)常量。
5. 什么是鹽析？鹽析會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性嗎？一般用什么試劑?
答;鹽析是指當(dāng)溶液中的中性鹽持續(xù)增加時(shí)，蛋白質(zhì)的溶解度下降，當(dāng)中性鹽的濃度達(dá)到一定程度的時(shí)候，蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象。鹽析不會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的結(jié)構(gòu)并未發(fā)生改變，去掉引起鹽析的因素蛋白質(zhì)仍能溶解；一般用飽和硫酸銨溶液進(jìn)行鹽析
6. 簡(jiǎn)述DNS法測(cè)定還原糖濃度的實(shí)驗(yàn)原理？
答;還原糖與DNS在堿性條件下加熱被氧化成糖酸，而DNS被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)還原糖的量與3-氨基-5硝基水楊酸顏色的深淺成正比，用分光光度
計(jì) 測(cè)出溶液的吸光度，通過(guò)查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線可計(jì)算出3-氨基-5硝基水楊酸的濃度，從而得出還原糖的濃度。
7. 影響蛋白質(zhì)沉淀的因素是什么？沉淀和變性有什么聯(lián)系？
答;水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面形成水化層和雙電層從而形成穩(wěn)定的親水膠
體顆粒，在一定的理化因素影響下蛋白質(zhì)顆粒因失去電荷和脫水而沉淀。這些因素包括溶液的酸堿度、鹽溶液的濃度、溫度、重金屬離子以及有機(jī)溶劑等。變性蛋白質(zhì)不一定沉淀，沉淀的蛋白質(zhì)不一定變性。沉淀時(shí)蛋白質(zhì)可能仍然保持天然構(gòu)像，而變性是蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)被破壞失去活性。
8. 簡(jiǎn)述薄層層析法分離糖類的原理/?
答;薄層層析的實(shí)質(zhì)就是吸附層析，也就是在鋪有吸附劑的薄層上，經(jīng)過(guò)反復(fù)地被吸附劑吸附以及被擴(kuò)展劑擴(kuò)展的過(guò)程。而吸附劑對(duì)不同的物質(zhì)的吸附力不同，從而使糖在薄層上的涌動(dòng)速度不同達(dá)到分離的目的
9. 等電點(diǎn)的定義？蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)有哪些特點(diǎn)？
答;當(dāng)溶液的PH為一定數(shù)值時(shí)，其中的蛋白質(zhì)正負(fù)電荷相等，即凈電荷為零，此時(shí)的PH值就是該蛋白質(zhì)等電點(diǎn)。蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)的溶解度最小。
10. 蛋白質(zhì)顯色黃色反應(yīng)的原理是什么?反應(yīng)結(jié)果為什么深淺不一？
答;含有苯環(huán)的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黃色的物質(zhì)，而且不同蛋白質(zhì)中所含的苯環(huán)數(shù)量不同，造成與試劑反應(yīng)的程度不同，因此呈現(xiàn)顏色深淺不一 。
11. RNA水解后的三大組分是什么？怎樣各自驗(yàn)證的？
答;核糖，磷酸，嘌呤堿。核糖+苔黒酚—Fe（濃HCI）綠色物質(zhì)；磷酸+鉬酸銨——藍(lán)色；嘌呤堿+硝酸銀——白色
12. 等電點(diǎn)時(shí)為什么蛋白質(zhì)溶解度最低？
答;蛋白質(zhì)形成膠體二等條件是帶電荷，從而在外表面形成水化膜，導(dǎo)致各膠體顆粒不結(jié)合，當(dāng)PH等于PI時(shí)，靜電荷為零，蛋白質(zhì)分子之間不存在排斥，則聚集沉淀，所以在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最小。
13. 雞蛋清可以用作鉛汞中毒的解毒劑是為什么?
答;由于重金屬離子能與蛋白質(zhì)中帶負(fù)電基團(tuán)如—COOH等作用，生成難溶重金屬的蛋白質(zhì)鹽，減少機(jī)體對(duì)重金屬的吸收。
14. 血清醋酸纖維薄膜電泳可將血清蛋白依次分為哪幾條帶？哪帶電泳最
快？影響電泳速度有哪些？
答;有血清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白、r-球蛋白；其中血清蛋白點(diǎn)用最快。影響因素蛋白質(zhì)所帶電荷數(shù)，分子大小與形狀以及緩沖液濃度。
15. 什么是抑制劑？什么是變性劑？區(qū)別是什么？
答;凡是能使酶活性降低而不使酶失活變性的物質(zhì)成為抑制劑；凡是能引起蛋白質(zhì)變性失活的物質(zhì)叫變性劑。抑制劑只是抑制蛋白質(zhì)的特性而變性劑則破環(huán)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。
16 簡(jiǎn)述橘皮中提取果膠原理？
答；果膠不溶于乙醇的原來(lái)將其沉淀得到果膠。
17 離心管如何在天平上平衡？操作離心時(shí)應(yīng)注意什么?
答;把放在小燒杯中的離心管（包括蓋子）和管套放在平衡的天平上，用膠頭滴管取離心液調(diào)平。注意點(diǎn)：配平、等重的試管放在對(duì)稱的位置；啟動(dòng)時(shí)要先蓋好蓋子，停止后才能開蓋；有不正常的聲音時(shí)應(yīng)按STOP鍵,而不是POWER鍵；禁止把小而中的東西放在離心機(jī)上以防傷人。
篇四：生化實(shí)驗(yàn)題庫(kù)
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)考核試題庫(kù)
要求：參加考核的每位學(xué)生須從1－6號(hào)題中隨機(jī)抽1題，從7－12號(hào)題中隨機(jī)抽1題，從13－37號(hào)題中隨機(jī)抽1題，從38－46號(hào)題中隨機(jī)抽1題，共計(jì)4道考核題進(jìn)行考核，總分為60分。
一、理論考核題
1鹽析和鹽溶（3分） 2電泳（3分） 3層析（色譜）（3分） 4酶的活力單位（3分）5比活力（3分） 6分子篩效應(yīng)（3分） 7電泳的原理（4分）
8離子交換層析的原理（4分）9親和層析的原理（4分）
10凝膠過(guò)濾層析的原理（4分）
11吸附層析的原理（4分）
12透析技術(shù)的基本原理及其應(yīng)用（4分）
13聚丙烯酰胺凝膠電泳的主要優(yōu)點(diǎn)及用途（6分）
14按層析過(guò)程的機(jī)理，層析法分哪四類？按操作形式不同又分哪三類？（7分） 15普通離心機(jī)的使用注意事項(xiàng)？（6分）
16可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)？（6分）
17蛋白質(zhì)含量測(cè)定的常用方法有那些？（6分）
18粗脂肪的提取和含量測(cè)定的基本原理（6分）
19索氏提取器是由哪幾部分組成的？（6分）
20粗脂肪的提取和含量測(cè)定的簡(jiǎn)要操作步驟（6分）
21粗脂肪的提取實(shí)驗(yàn)中如何減少誤差？（6分）
22凱氏定氮法測(cè)定總氮量的基本原理（6分）
23凱氏定氮實(shí)驗(yàn)中用到的主要器材有哪些？（6分）
24核酸的含量測(cè)定常用的方法有哪些？（6分）
25雙倒數(shù)法測(cè)定米氏常數(shù)的基本原理（6分）
26雙倒數(shù)法測(cè)定米氏常數(shù)的實(shí)驗(yàn)中，決定實(shí)驗(yàn)成敗的因素有哪些？關(guān)鍵因素是什么？（7分）
27生物細(xì)胞的破碎的常用方法有哪些？（6分）
28酶的制備及提取過(guò)程中常注意哪些事項(xiàng)？（6分）
29蛋白質(zhì)的分離常用的方法有哪些？（6分）
30甲醛滴定法測(cè)定氨基酸的基本原理（6分）
31為什么SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳可以用來(lái)測(cè)定未知蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量？（6分） 32連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳與不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳有什么不同？（6分） 33聚丙烯酰胺凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)？（6分）
34瓊脂糖凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)？（6分）
35提取某種植物組織中的總DNA時(shí)，使用的細(xì)胞提取液中的主要試劑成分是什么？各有什么作用？（7分）
36如何證明提取到的某種核酸是DNA還是RNA？（6分）
37聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白時(shí)，使用的電泳緩沖液PH＝8.3，那么樣品應(yīng)點(diǎn)在哪端？為什么？（6分）
二、技能或?qū)嶒?yàn)操作考核題
38說(shuō)明紙層析和離子交換層析分離氨基酸混合物的方法是根據(jù)氨基酸的什么性質(zhì)? 列出紙層析和柱層析的一般操作步驟。（10分）
39凝膠電泳的一般操作步驟（11分）
40普通離心機(jī)的使用操作（示范）（10分）
41可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用操作（示范）（10分）
42如果要105攝氏度干燥某種物質(zhì)，如何使用干燥箱（示范）? （10分）
43要稱取某種藥品2.0g，如何使用天平（示范）？（10分）
44要配制500ml 0.01mol/L的NaOH溶液應(yīng)如何配制？（10分）
45配制1L 0.01mol/L的HCl溶液應(yīng)如何配制（已知濃鹽酸比重是1.19g/L，重量百分比濃度為36.5％）？（11分）
46分別配制出10μg/ml，5μg/ml，2μg/ml，1μg/ml的DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液，應(yīng)如何配制？（盡可能節(jié)約）（10分）
答案：
1、鹽析和鹽溶：鹽析：在蛋白質(zhì)溶液中加入一定量的高濃度中性鹽(如硫酸氨),使蛋白質(zhì)溶解度降低并沉淀析出的現(xiàn)象稱為鹽析。鹽溶：加入少量中性鹽可增加蛋白質(zhì)的溶解度,即鹽溶現(xiàn)象。
2、電泳：帶電粒子在直流電場(chǎng)中向著 所帶電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。
3、層析（色譜）：用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇性分配,以流動(dòng)相對(duì)固定相中的混合物進(jìn)行洗脫，使混合物各組分以不同速度移動(dòng)，從而達(dá)到分離的一種物理方法。
4、酶的活力單位：是指在特定條件下(25℃、最適的pH值和底物濃度),每分鐘可催化1微摩爾(10-6摩爾)底物轉(zhuǎn)化所需要的酶量。
5、比活力：代表酶制劑的純度。根據(jù)國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)規(guī)定比活力用每毫克蛋白所含的酶活力單位數(shù)表示。
6、分子篩效應(yīng)：凝膠本身具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),大的分子在通過(guò)這種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上的孔隙時(shí)阻力較大,小分子通過(guò)時(shí)阻力較小。分子量大小不同的多種成份在通過(guò)凝膠床時(shí),按照分子量大小“排隊(duì),凝膠表現(xiàn)分子篩效應(yīng)。
7、電泳的原理：電泳是指帶電顆粒在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。許多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等都具有可電離基團(tuán)，它們?cè)谀硞�(gè)特定的pH值下可以帶正電或負(fù)電，在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng)。電泳技術(shù)就是利用在電場(chǎng)的作用下，由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的技術(shù)。
8、離子交換層析的原理：離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相,利用它與流動(dòng)相中的離子能進(jìn)行可逆的交換性質(zhì)來(lái)分離離子型化合物的一種方法。
9、親和層析的原理：親和層析是應(yīng)用生物高分子與配基可逆結(jié)合的原理,將配基通過(guò)共價(jià)鍵牢固結(jié)合于載體上而制得的層析系統(tǒng)。這種可逆結(jié)合的作用主要是靠生物高分子對(duì)它的配基的空間結(jié)構(gòu)的識(shí)別。
10、凝膠過(guò)濾層析的原理：一種利用帶孔凝膠珠作基質(zhì)，按照分子大小分離蛋白質(zhì)或其它分子混合物的層析技術(shù)。凝膠過(guò)濾層析具有分子篩效應(yīng)。
11、吸附層析的原理：組份在吸附劑表面吸附固定相是固體吸附劑,各能力不同而進(jìn)行分離的方法。
12、透析技術(shù)的基本原理及其應(yīng)用：
13、聚丙烯酰胺凝膠電泳的主要優(yōu)點(diǎn)及用途：①聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和N，N'甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝膠有 格子是帶有酰胺側(cè)鏈的碳-碳聚合物，沒(méi)有或很少帶有離子的側(cè)基，因而電滲作用比較小，不易和樣品相互作用。
�、谟捎诰郾０纺z是一種人工合成的物質(zhì)，在聚合前可調(diào)節(jié)單體的濃度比，形成 不同程度交鏈結(jié)構(gòu)，其空隙度可在一個(gè)較廣的范圍內(nèi)變化，可以根據(jù)要分離物質(zhì)分子 的大小，選擇合適的凝膠成分，使之既有適宜的空隙度，又有比較好的機(jī)械性質(zhì)。一 般說(shuō)來(lái)，含丙烯酰胺7-7.5%的凝膠，機(jī)械性能適用于分離分子量范圍不1萬(wàn)至100萬(wàn)物 質(zhì)，1萬(wàn)以下的蛋白質(zhì)則采用含丙烯酰胺15-30%的凝膠，而分子量特別大的可采
用含 丙烯酰胺4%的凝膠，大孔膠易碎，小孔膠則難從管中取出，因此當(dāng)丙烯酰胺的濃度增 加時(shí)可以減少雙含丙烯酰胺，以改進(jìn)凝膠的機(jī)械性能。
�、墼谝欢舛确秶郾０穼�(duì)熱穩(wěn)定。凝膠無(wú)色透明，易觀察，可用檢測(cè)儀直接測(cè)定。
�、鼙０肥潜容^純的化合物，可以精制，減少污染。合成聚丙烯酰胺凝膠的原料是丙烯酰胺和甲撐雙丙烯酰胺。丙烯酰胺稱單體，甲撐雙 丙烯酰胺稱交聯(lián)劑，在水溶液中，單體和交聯(lián)劑通過(guò)自由基引發(fā)的聚合反應(yīng)形成凝膠。
14、按層析過(guò)程的機(jī)理，層析法分哪幾類？按操作形式不同又分哪三類？：根據(jù)分離的原理不同分類，層析主要可以分為吸附層析、分配層析、凝膠過(guò)濾層析、離子交換層析、親和層析等。按操作形式不同又分層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。
15、普通離心機(jī)的使用注意事項(xiàng)？：
(1).離心機(jī)要置水平位置,以保證旋轉(zhuǎn)軸垂直地球水平面。
(2).使用前應(yīng)檢查套環(huán)是否平衡(臺(tái)稱)。
(3).離心杯及其外套(離心管套)是否平衡(臺(tái)稱)。
(4).樣品傾入離心杯后應(yīng)與離心管套一起兩兩平衡，平衡后把它們放置于轉(zhuǎn)子的對(duì)稱位置。
(5).蓋好蓋子,打開電源開關(guān),調(diào)整離心時(shí)間。
(6).啟動(dòng)離心時(shí)轉(zhuǎn)速應(yīng)由小至大,緩慢升速(一般要2~3min)。
(7).達(dá)到預(yù)定轉(zhuǎn)速后再調(diào)整離心時(shí)間至預(yù)定時(shí)間(10min)。
(8).離心完成后要調(diào)整調(diào)速連桿至零位,同時(shí)關(guān)上電源。
(9).要等到轉(zhuǎn)速為零時(shí)才能打開離心機(jī)蓋,取出樣品。
16、可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)？：（1） 使用過(guò)程中比色皿的四個(gè)面在槽中保持一定的位置,取用比色皿時(shí)手應(yīng)該捏住四個(gè)棱而不能碰到面。比色皿應(yīng)該避免磨損透光面。
�。�2） 使用過(guò)程中不得打開蓋子，保持儀器清潔,為避免溶液灑落對(duì)儀器造成的腐蝕，所有溶液的配置、傾倒都不要在儀器附近操作。比色皿放進(jìn)樣品池之前必須把外表面擦干。
�。�3）當(dāng)（僅當(dāng)）操作者錯(cuò)誤操作或其他干擾引起微機(jī)錯(cuò)誤時(shí)，應(yīng)該立即關(guān)斷主機(jī)電源，重新啟動(dòng)，但無(wú)須關(guān)斷燈源電源。
�。�4）光學(xué)器件和儀器運(yùn)行環(huán)境需保護(hù)清潔。清潔儀器外表時(shí) ,請(qǐng)勿使用乙醇乙醚等 有機(jī)溶劑,請(qǐng)勿在工作中清潔,不使用時(shí)請(qǐng)加防塵罩。
17、蛋白質(zhì)含量測(cè)定的常用方法有那些？：（1）微量凱式定氮法。（2）雙縮脲法。（3）folin－酚試劑法。（4）紫外分光光度法。（5）考馬斯亮藍(lán)染色法。
18、粗脂肪的提取和含量測(cè)定的基本原理。：脂肪是丙三醇(甘油)和脂肪酸結(jié)合成的脂類化合物, 能溶于脂溶性有機(jī)溶劑。本實(shí)驗(yàn)用重量法，利用脂肪能溶于脂溶性溶劑這一特性，用脂溶性溶劑將脂肪提取出來(lái)，借蒸發(fā)除去溶劑后稱量。整個(gè)提取過(guò)程均在索氏提取器中進(jìn)行。通常使用的脂溶性溶劑為乙醚或沸點(diǎn)為30oC -60 oC的石油醚。用此法提取的脂溶性物質(zhì)除脂肪外，還含有游離脂肪酸、磷酸、固醇、芳香油及某些色素等，故稱為“粗脂肪”。
19、索氏提取器是由哪幾部分組成的？：提取瓶，提取管和冷凝管三部分組成。
20、粗脂肪的提取和含量測(cè)定的簡(jiǎn)要操作步驟（6分）：1.抽提瓶在105℃±2℃烘箱中烘至恒重，材料干燥至恒重。
2.稱取干燥后的材料1-2g,放入研缽中研磨(越細(xì)越好)將研磨好的材料用脫脂濾紙包住,用少許脫脂棉擦拭研缽壁上粘的材料及油脂,也一并放入濾紙包. 用棉線拴住濾紙包,將濾紙包放入抽提管，在抽提瓶中加入2/3體積的無(wú)水乙醚在70-75℃的水浴上加熱，使乙醚回流，控制乙醚回流次數(shù)為每小時(shí)約10次，共回流約50次，或檢查抽提管流出的乙醚揮發(fā)后不留
下油跡為抽提終點(diǎn)。
3 取出試樣，仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶全部吸完，擦凈瓶外壁，將抽提瓶放入105℃±2℃烘箱中烘干至恒重。
21、粗脂肪的提取實(shí)驗(yàn)中如何減少誤差？（6分）：（1）材料和提取瓶充分干燥。（2）材料盡可能的不損失。(3)提取充分完全。（4）提取后瓶子還要充分的干燥。
22、凱氏定氮法測(cè)定總氮量的基本原理（6分）：樣品與濃硫酸共熱,含氮有機(jī)物即分解產(chǎn)生氨,氨又與硫酸作用變成硫氨.經(jīng)強(qiáng)堿堿化使之分解放出氨,借蒸汽將氨蒸至酸液中,根據(jù)此酸液 被中和的程度可計(jì)算得樣品氮的含量.以甘氨酸為例:
1.有機(jī)物中的氮在強(qiáng)熱和CuSO4，濃H2SO4 作用下，消化生成（NH4）2SO4
反應(yīng)式為： H2SO4==SO2+H2O+[O]
R. CH.COOH+[O]==R.CO.COOH+NH3
NH3
R.CO.COOH+[O]==nCO2+mH2O
2NH3+H2SO4==(NH4)2SO4
2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過(guò)蒸餾釋放出NH3 ，收集于 H3BO3 溶液中。
反應(yīng)式為:2NH4++OH-==NH3+H2O
NH3+H3BO3==NH4++H2BO3-
3. 再用已知濃度的HCI標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)HCI消耗的量計(jì)算出氮的含量，然
后乘以相應(yīng)的換算因子，既得蛋白質(zhì)的含量。
23、凱氏定氮實(shí)驗(yàn)中用到的主要器材有哪些？（6分）：凱氏燒瓶 ，容量瓶
凱氏定氮裝置移液管 酸式滴定管 分析天平 電爐 烘箱
24、核酸的含量測(cè)定常用的方法有哪些？（6分）（1）紫外分光光度法；
（2）定磷法：鉬藍(lán)比色法
�。�3）定糖法：
RNA+鹽酸——糠醛+地衣酚——Ａ670，鮮綠色；
DNA+二苯胺——Ａ595,藍(lán)色化合物
�。�4）瓊脂糖凝膠電泳法
25、雙倒數(shù)法測(cè)定米氏常數(shù)的基本原理（6分）： Lineweaver和Burk將米氏方程改寫成倒數(shù)形式：
26、雙倒數(shù)法測(cè)定米氏常數(shù)的實(shí)驗(yàn)中，決定實(shí)驗(yàn)成敗的因素有哪些？關(guān)鍵因素是什么？（7分）
27、生物細(xì)胞的破碎的常用方法有哪些？6分）：機(jī)械法：研磨，高速搗碎機(jī)；物理法：反復(fù)凍溶，超聲波破碎，壓榨法；化學(xué)雨生物化學(xué)法：自溶，溶脹法，酶解法，有機(jī)溶劑處理。
28、酶的制備及提取過(guò)程中常注意哪些事項(xiàng)？（6分）：
29、蛋白質(zhì)的分離常用的方法有哪些？（6分）：1、前處理：選擇適當(dāng)?shù)钠扑榧?xì)胞的方法破碎細(xì)胞，組織細(xì)胞破碎后，選擇適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)（一般用緩沖液）把所要的蛋白質(zhì)提取出來(lái)。2、粗分離：當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)混合物提取液獲得后，選用一套適當(dāng)?shù)姆椒�，將所要的蛋白質(zhì)與其他雜蛋白質(zhì)分離開來(lái)。一般這一步的分級(jí)用鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法。這種方法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、處理量大，既能除去大量雜質(zhì)，又能濃縮蛋白質(zhì)溶液。
3、細(xì)分離：也就是樣品的進(jìn)一步提純，一般使用層析法，包括凝膠過(guò)濾層析，離子交換層析，吸附層析以及親和層析等。必要時(shí)還可以選擇電泳法。
30、甲醛滴定法測(cè)定氨基酸的基本原理（6分）：
31、為什么SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳可以用來(lái)測(cè)定未知蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量？（6分）：在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中，加入一定量的十二烷基硫酸鈉（SDS），形成蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物，這種復(fù)合物由于結(jié)合了大量的SDS，使蛋白質(zhì)喪失了原有的電荷狀態(tài)，形成了僅保持原有分子大小為特征的負(fù)離子團(tuán)塊，從而降低或消除了各種蛋白質(zhì)分子之間的天然的電荷差異，此時(shí)，蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決于它的分子量大小，而其它因素對(duì)電泳遷移率的影響幾乎可以忽略不計(jì)。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在15000～200000之間時(shí)，電泳遷移率與分子量的對(duì)數(shù)值呈直線關(guān)系，符合下列方程：
㏒10Mr = －b·mR + K
32、連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳與不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳有什么不同？（6分）：不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳包含了兩種以上的緩沖液成分、pH值和凝膠孔徑，而且在電泳過(guò)程中形成的電位梯度亦不均勻。由此產(chǎn)生的濃縮效應(yīng)、電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。
33、聚丙烯酰胺凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)？（6分）：①聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和N，N'甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝膠有 格子是帶有酰胺側(cè)鏈的碳-碳聚合物，沒(méi)有或很少帶有離子的側(cè)基，因而電滲作用比較小，不易和樣品相互作用。
�、谟捎诰郾０纺z是一種人工合成的物質(zhì)，在聚合前可調(diào)節(jié)單體的濃度比，形成 不同程度交鏈結(jié)構(gòu)，其空隙度可在一個(gè)較廣的范圍內(nèi)變化，可以根據(jù)要分離物質(zhì)分子 的大小，選擇合適的凝膠成分，使之既有適宜的空隙度，又有比較好的機(jī)械性質(zhì)。一 般說(shuō)來(lái)，含丙烯酰胺7-7.5%的凝膠，機(jī)械性能適用于分離分子量范圍不1萬(wàn)至100萬(wàn)物 質(zhì)，1萬(wàn)以下的蛋白質(zhì)則采用含丙烯酰胺15-30%的凝膠，而分子量特別大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝膠，大孔膠易碎，小孔膠則難從管中取出，因此當(dāng)丙烯酰胺的濃度增 加時(shí)可以減少雙含丙烯酰胺，以改進(jìn)凝膠的機(jī)械性能。
�、墼谝欢舛确秶郾０穼�(duì)熱穩(wěn)定。凝膠無(wú)色透明，易觀察，可用檢測(cè)儀直接測(cè)定。 ④丙烯酰胺是比較純的化合物，可以精制，減少污染。合成聚丙烯酰胺凝膠的原料是丙烯酰胺和甲撐雙丙烯酰胺。丙烯酰胺稱單體，甲撐雙 丙烯酰胺稱交聯(lián)劑，在水溶液中，單體和交聯(lián)劑通過(guò)自由基引發(fā)的聚合反應(yīng)形成凝 膠。
34、瓊脂糖凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)？（6分）：（1）瓊脂含液體量 大，可達(dá)98-99%，近似自由電泳，但是樣品的擴(kuò)散度比自由電泳小，對(duì)蛋白質(zhì)的吸附 極微。（2）瓊脂作為支持體有均勻，區(qū)帶整齊，分辨率高，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。（3） 電泳速度快。（4）透明而不吸收紫外線，可以直接用紫外檢測(cè)儀作定量測(cè)定。（5） 區(qū)帶易染色，樣品易回收，有利于制止備。然而瓊脂中有較多硫酸根，電滲作用大。 瓊脂糖是從瓊脂中提取出來(lái)的，是由半乳糖和3.6-脫水-L- 半乳糖相互結(jié)合的鏈狀多 糖。含硫酸根比瓊脂少，因而分離效果明顯提高。瓊脂（糖）電泳常用緩沖液的pH在6-9之間，離子強(qiáng)度為0.02-0.05。離子強(qiáng)度過(guò) 高時(shí)，會(huì)有大量電流通過(guò)凝膠，因而產(chǎn)生熱量，使凝膠的水份量蒸發(fā)，析出鹽的結(jié) 晶，甚至可使凝膠斷裂，
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