促骨方對家兔實驗性骨折愈合的影響及鎮(zhèn)痛作用討論論文
軟組織損傷，中醫(yī)稱為傷筋，是指人體骨骼周圍的皮膚、皮下組織、肌肉、肌健、筋膜、韌帶、腱鞘、關(guān)節(jié)囊等組織的損傷。受傷后，筋肉或損或斷，經(jīng)脈絡(luò)脈隨之受傷，氣血互阻，血腫形成，引起疼痛、腫脹和功能障礙。四肢骨折的早期同樣存在軟組織損傷，瘀血阻滯是其主要的病理機(jī)制，故二者均表現(xiàn)為局部腫脹、疼痛、活動受限。促骨方具有活血散瘀、消腫止痛的功效，用于急性軟組織損傷及骨折中、早期瘀血阻滯所致的腫脹、疼痛及肢體功效障礙。針對其功能主治，本研究對促骨方促進(jìn)家兔橈骨骨折模型的'愈合作用進(jìn)行了藥效學(xué)研究。
1 材料與儀器
1. 1 實驗動物
普通級新西蘭兔，體質(zhì)量( 2 ±0. 2) kg，雌雄各半，由長沙市東創(chuàng)實驗動物科技服務(wù)部提供，合格證號: 20101696。SPF 級昆明小鼠，體質(zhì)量( 20 ± 2) g，雌雄兼用，由長沙市東創(chuàng)實驗動物科技服務(wù)部提供，合格證號: 20101694。
1. 2 藥物與試劑促骨方，由湖南省中醫(yī)藥研究
院中藥研究所制劑實驗室提供，1 g 浸膏粉相當(dāng)于4. 67 g 生藥( 處方系湖南省中醫(yī)藥研究院李若存研究員的臨床經(jīng)驗方: 由三七、丹參、積雪草、槐米組成) 。藥材委托湖南省九旺醫(yī)藥有限公司定點采購，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院李若存研究員鑒定，質(zhì)量符合藥典要求。制備工藝: 三七、丹參、槐米用75%乙醇加熱回流提取2 次( 5 倍量，4倍量) ，每次提取1. 5 h，濾過，濾液減壓回收乙醇，并濃縮至密度為1. 30 ～ 1. 35( 60 ℃) 的清膏，備用; 積雪草加水煎煮2 次( 12 倍水，10 倍水) ，每次1. 5 h，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 10 ～ 1. 15 ( 60 ℃) 的清膏，加乙醇使含醇量達(dá)65%，攪勻，靜置24 h，濾過，濾液減壓回收乙醇，并濃縮至相對密度為1. 30～ 1. 35( 60 ℃) 的清膏，與上述清膏合并，真空干燥( 真空度0. 08 ～ 0. 09 MPa，溫度70 ～ 80 ℃) ，粉碎成細(xì)粉，臨用時取浸膏粉，加適量蒸餾水配制成所需濃度的懸濁液，批號: 20101024。三七傷藥膠囊，廣西玉林制藥有限責(zé)任公司，批號: 20120328; 吲哚美辛片，山西太原藥業(yè)有限公司，批號: 20100801; 硫化鈉，上海統(tǒng)亞化工科技發(fā)展有限公司，批號: 071220;注射用青霉素，哈藥集團(tuán)制藥總廠生產(chǎn)，批號:A101203106; 烏拉坦，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號: T20101026。
1. 3 主要儀器
BP1502 型電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司; GJ-8402 型熱板測定儀，浙江海寧白石電子醫(yī)藥儀器廠。
2 方法
2. 1 促骨方對家兔實驗性骨折愈合的影響
2. 1. 1 動物分組、造模及給藥: 取新西蘭兔60 只，均靜脈注射40%烏拉坦2. 5 mL /kg 麻醉后，動物右腿剪毛，用碘酒及酒精消毒，在無菌條件下手術(shù)，用骨鋸造成家兔右前肢橈骨中段3 mm 完全缺損，術(shù)畢縫合傷口，給青霉素5 萬單位/只肌注，連續(xù)3 d，以預(yù)防感染〔1，2〕。隨機(jī)將家兔分成5 組，即模型組( 蒸餾水) 、三七傷藥膠囊( 0. 63 g /kg) 陽性對照組及促骨方低( 1. 428 g /kg ) 、中( 4. 284 g /kg ) 、高( 8. 568 g /kg) 劑量組，每組12 只，灌胃給藥，灌胃體積為5. 0 mL /kg，1 次/d，連續(xù)30 d。
2. 1. 2 局部皮膚腫脹程度檢測: 各組動物于手術(shù)前及手術(shù)后第1、3、5、7 天用細(xì)絲線繞創(chuàng)口正中測量右肢周長作為腫脹程度。
2. 1. 3 X 光檢查: 于手術(shù)后1、15、30 天，各組取動物拍攝雙側(cè)橈骨X 光片，拍攝條件為46 kV，100mA，28 mAs，60 cm。采用柴本甫，過邦輔方法評價，擬定四級骨折愈合標(biāo)準(zhǔn): Ⅰ級: 骨缺損清晰存在，中間無骨組織影; Ⅱ級: 骨缺損兩端有骨質(zhì)增生影，缺損中間有云霧影樣骨組織; Ⅲ級: 缺損中間有明顯骨痂組織填充，但仍可見缺損印痕; Ⅳ級: 缺損處已完全被骨組織影填充，缺損印痕難以辨認(rèn)。以上4 級分別計1、2、3、4 分，計算并比較各組動物的平均積分。
2. 1. 4 光鏡組織病理學(xué)檢查: 各組動物于手術(shù)后30 d 評定骨痂組織愈合程度: Ⅰ級: 骨痂部位以纖維性骨痂為主; Ⅱ級: 骨痂具有大量的軟骨組織; Ⅲ級: 骨痂部位軟骨或骨小梁各約占50%; Ⅳ級: 骨痂部位以交織的骨小梁為主。以上4 級分別計1、2、3、4 分，計算并比較各組動物的平均積分。
2. 2 小鼠熱板試驗選痛閾值在5 ～ 30 s 的雌性小鼠50 只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組，即對照組( 蒸餾水20 mL /kg) ，吲哚美辛( 0. 005 g /kg) 陽性對照組及促骨方低( 3. 98 g /kg ) 、中( 11. 94 g /kg ) 、高( 23. 88 g /kg) 劑量組，灌胃給藥，體積為20 mL /kg，1次/d，連續(xù)7 d。末次給藥后30、60、90 min 用熱板測痛儀測小鼠痛閾值。
2. 3 小鼠扭體試驗取小鼠50 只，按性別體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組，即對照組( 蒸餾水20 mL /kg) ，吲哚美辛( 0. 005 g /kg) 陽性對照組及促骨方低( 3. 98 g /kg) 、中( 11. 94 g /kg) 、高( 23. 88 g /kg) 劑量組，灌胃給藥，體積為20 mL /kg，1 次/d，連續(xù)7 d，末次給藥后1 h，每鼠腹腔注射0. 6%醋酸0. 2 mL，秒表計時，記錄20 min 內(nèi)小鼠扭體潛伏期及扭體次數(shù)。
2. 4 統(tǒng)計學(xué)處理計量資料均采用珋x ± s 表示，組間比較采用方差分析，以P < 0. 05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
3 結(jié)果
3. 1 促骨方對家兔實驗性骨折愈合的影響
3. 1. 1 促骨方對實驗性骨折家兔局部軟組織腫脹的影響: 結(jié)果如表1 所示，與模型組比較，各給藥組在給藥后1、3、5 天對家兔骨折部位腫脹度顯著低于模型組( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
3. 1. 2 促骨方對實驗性骨折家兔損傷部位愈合的影響: 結(jié)果如表2 所示，治療第15 天，促骨方中、高劑量組及三七傷藥膠囊組X 光平均積分顯著高于模型組( P < 0. 05 或P < 0. 01) ; 治療第30 天，各給藥組X 光平均積分均顯著高于模型組( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
3. 1. 3 促骨方對實驗性骨折家兔骨痂組織愈合的影響:與模型組比較，促骨方高劑量和陽性藥對家兔骨折部位骨痂的形成和骨折的修復(fù)有明顯的促進(jìn)作用( P < 0. 01，P < 0. 05) 。而促骨方中、低劑量的作用不明顯( P > 0. 05) 。
3. 2 熱板法檢測促骨方對小鼠痛閾的影響結(jié)果如表4 所示，與對照組比較，促骨方中、高劑量組及吲哚美辛組小鼠痛閾在30、60、90 min 時顯著升高( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
3. 3 促骨方對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響結(jié)果如表5 所示，與對照組比較，各給藥組小鼠潛伏期均顯著延長( P < 0. 05 或P < 0. 01) ，扭體次數(shù)顯著減少( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
4 討論
中醫(yī)認(rèn)為，外來暴力猛烈撞擊、重物挫壓、不慎跌倒、強(qiáng)力扭轉(zhuǎn)均可引起急性傷筋。受傷后，筋肉或損或斷，經(jīng)脈絡(luò)脈隨之受傷，氣血互阻，血腫形成，引起疼痛、腫脹和功能障礙。四肢骨折的早期同樣存在軟組織損傷，瘀血阻滯是其主要的病理機(jī)制，故二者均表現(xiàn)為局部腫脹、疼痛、活動受限。治當(dāng)以活血散瘀，消腫止痛，促進(jìn)損傷組織愈合為法則。本實驗結(jié)果表明，連續(xù)口服促骨方30 d，對實驗性骨折家兔早期局部軟組織腫脹有明顯的消腫作用，X 光檢查和病理檢查證明，分別在15、30 d 均能促進(jìn)家兔骨折部位骨痂的生長和愈合。還能提高熱板法致痛小鼠的痛閾，延長醋酸致痛小鼠發(fā)生扭體反應(yīng)的潛伏期及減少小鼠扭體次數(shù)，有明顯的促進(jìn)骨折愈合和鎮(zhèn)痛作用，為促骨方臨床應(yīng)用提供了實驗依據(jù)。
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