分子生物學(xué)技術(shù)論文參考
隨著醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，生物學(xué)也不斷在創(chuàng)新，其中，現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)起到關(guān)鍵作用。下面小編整理了分子生物學(xué)技術(shù)論文，歡迎閱讀!
農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中的分子生物學(xué)技術(shù)
【摘 要】本文主要介紹了酶聯(lián)免疫分析技術(shù)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)、試紙條快速檢測技術(shù)、流動注射免疫分析技術(shù)等分子生物學(xué)檢測技術(shù)的原理、開發(fā)及其在農(nóng)產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)檢測中的應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】農(nóng)產(chǎn)品;有毒有害物質(zhì);分子生物學(xué);檢測技術(shù)
0 前言
民以食為天，食以安為先。農(nóng)產(chǎn)品安全性要求農(nóng)產(chǎn)品中不應(yīng)含有可能損害或威脅人體的物質(zhì)或因素，它關(guān)系到人體健康和社會穩(wěn)定。隨著世界經(jīng)濟(jì)全球化、貿(mào)易自由化和農(nóng)產(chǎn)品國際貿(mào)易的迅速發(fā)展，農(nóng)產(chǎn)品安全已成為事關(guān)人民健康和構(gòu)建和諧社會的重大戰(zhàn)略問題，及時、安全、準(zhǔn)確地檢測出農(nóng)產(chǎn)品中的病原微生物是農(nóng)產(chǎn)品安全檢測的重要內(nèi)容。隨著農(nóng)產(chǎn)品分析物質(zhì)的不斷微量和痕量化，農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)的不斷復(fù)雜，僅使用傳統(tǒng)分析技術(shù)已難以解決所有的問題。分子生物學(xué)技術(shù)不僅可以簡化前處理過程、而且操作簡便、檢測成本低、安全可靠，且能進(jìn)行特異性處理分析，其在農(nóng)產(chǎn)品分析中占據(jù)越來越高的比例[1]，目前在農(nóng)產(chǎn)品 檢測中常用的`技術(shù)包括：酶聯(lián)免疫分析技術(shù)(ELISA)、基因芯片技術(shù)、分子印跡技術(shù)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)、試紙條快速檢測技術(shù)、流動注射免疫分析技術(shù)、生物傳感器技術(shù)(biosensor)等。分子生物學(xué)技術(shù)解決了傳統(tǒng)農(nóng)產(chǎn)品前處理所不能解決的問題，特別是在農(nóng)產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)檢測中發(fā)揮了重要的作用。
1 應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中的分子生物學(xué)技術(shù)
1.1 酶聯(lián)免疫分析技術(shù)
酶聯(lián)免疫分析技術(shù)是20世紀(jì)70年代初期由荷蘭學(xué)者Weeman與Schurrs和瑞典學(xué)者Engvall與Perlman幾乎同時提出的。最初ELISA主要用于病毒和細(xì)菌的檢測，20世紀(jì)70年代后期開始廣泛應(yīng)用于抗原、抗體的測定，范圍涉及到一些藥物、激素、毒素等半抗原分子的定性定量檢測。它是在RIA理論的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性標(biāo)記免疫分析技術(shù)。它利用酶標(biāo)記物同抗原抗體復(fù)合物的免疫反應(yīng)與酶的催化放大作用相結(jié)合，既保持了酶催化反應(yīng)的敏感性，又保持了抗原抗體反應(yīng)的特異性，極大的提高了靈敏度，且克服了RIA操作過程中放射性同位素對人體的傷害。酶聯(lián)免疫分析法在農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中最為常用[2]。農(nóng)獸 藥殘留免疫分析方法的建立包括待測物選擇、半抗原合成、人工抗原合成、抗體制備、測定方法建立、樣本前處理方法和方法評價等步驟。ELISA具有樣品前處理簡單，純化步驟少，大量樣本分析時間短，適合于做成試劑盒現(xiàn)場篩選等優(yōu)點(diǎn)，使其可試驗快速現(xiàn)場監(jiān)測，是現(xiàn)階段農(nóng)產(chǎn)品安全檢測領(lǐng)域應(yīng)用較多的一項檢測技術(shù)。目前酶聯(lián)免疫檢測的農(nóng)、獸藥殘留種類主要包括：有機(jī)磷農(nóng)藥、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥、有機(jī)氯類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類、獸藥類等。
1.2 PCR技術(shù)(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù))
該技術(shù)誕生于1985年，由美國Cetus公司和加州大學(xué)聯(lián)合創(chuàng)建。PCR技術(shù)利用變性與復(fù)性原理，在體外使用DNA 聚合酶，在引物的引導(dǎo)和脫氧核糖核苷酸(dNTP)的參與下將模板在數(shù)小時內(nèi)進(jìn)行百萬倍擴(kuò)增。該技術(shù)可選擇性地放大特定的DNA序列，因此在農(nóng)產(chǎn)品致病性微生物檢測方面發(fā)揮著越來越重要的作用[3]。實時定量PCR技術(shù)是近年發(fā)展起來的新型技術(shù)，該技術(shù)通過直接測定PCR 過程中熒光信號的變化，利用電腦分析軟件對PCR過程中產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測和自動定量，從而成功地實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍。而且，使用實時定量PCR技術(shù)不需要進(jìn)行凝膠電泳，避免了交叉污染，使反應(yīng)具有更強(qiáng)的特異性和更高的自動化程度。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，多重PCR[4]、標(biāo)記 PCR和不對稱PCR等多種不同的PCR方法都被應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品檢測中，它們的應(yīng)用使PCR技術(shù)擁有了更高的靈敏度和更短的周期[5]。
1.3 試紙條快速檢測技術(shù)
試紙條與試劑盒相比較具有更加易于攜帶、檢測更加迅速等優(yōu)勢。在實際檢測過程中，特別是現(xiàn)場快速檢測，并不一定需要對每個樣品都獲得定量數(shù)據(jù) 而只需要定性地判別出某個樣品是否含有某種農(nóng)獸藥，含量是否超過規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)既可[6]。因此只需要幾分鐘或十幾分鐘就可以獲得結(jié)果的快速檢測試紙條是最為合 適的檢測工具[7]。試紙條技術(shù)與試劑盒相類似，其特點(diǎn)是以微孔膜作為固相載 體。標(biāo)記物可用酶或各種有色微粒子，如彩色乳膠、膠體金、膠體硒等，以紅色的膠體金最為常用。固相膜的特點(diǎn)在于其類似濾紙的多孔性。液體可穿過固相膜流出，也可以通過毛細(xì)管層析作用在膜上向前移行。常用的固相載體膜為硝酸纖維素膜、尼龍膜等。試紙條技術(shù)主要包括酶標(biāo)記免疫檢測技術(shù)(immunoenzyme labeling technique)和膠體金標(biāo)記免疫檢測技術(shù)(immunogold labelling technique)。酶標(biāo)記免疫檢測技術(shù)是以酶為示蹤標(biāo)記物，而膠體金標(biāo)記免疫檢測技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。
1.4 流動注射免疫分析技術(shù)
流動注射免疫分析法是將速度快、自動化程度高、重現(xiàn)性好的流動注射分析與特異性強(qiáng)、靈敏度高的免疫分析集為一體。這種分析方法具有分析時間短、需要樣品量小和操作簡便等特點(diǎn)[8]。利用FIIA對一些樣品分析，測定耗時不足 1min。FIIA有：均相FIIA和非均相FIIA。流動注射免疫分析主要包括：流動注射脂質(zhì)體免疫分析技術(shù)、流動注射熒光檢測、流動注射化學(xué)發(fā)光檢測、流動注射分光光度檢測和流動注射電化學(xué)檢測。利用FIIA 是一種靈敏性、專一性、準(zhǔn)確性好、快速、節(jié)約成本的方法，樣品也不需要預(yù)處理和富集。
2 結(jié)語
隨著經(jīng)濟(jì)的全球化發(fā)展和農(nóng)產(chǎn)品的跨區(qū)域、跨國際流通，對農(nóng)產(chǎn)品病原菌的檢測要求也越來越高。從定性和定量兩方面出發(fā)，準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟(jì)的檢測 方法是農(nóng)產(chǎn)品安全檢測的發(fā)展方向。盡管分子生物學(xué)檢測方法具有諸多優(yōu)點(diǎn)，但目前它們大多處于實驗室階段，不能廣泛應(yīng)用于實踐，僅能作為標(biāo)準(zhǔn)檢測方法的參考。因此，在今后的工作中應(yīng)進(jìn)一步加快研究步伐，建立真正實用的農(nóng)產(chǎn)品快速檢測方法。產(chǎn)品快速檢測方法。
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